專利名稱：促進(jìn)動(dòng)物生長的方法和含有殺死的梭狀芽胞桿菌屬的細(xì)菌的微生物細(xì)胞的粉末組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種促進(jìn)動(dòng)物生長的方法和一種含有殺死的梭狀芽胞桿菌屬的細(xì)菌的微生物細(xì)胞的粉末組合物。
抗菌物質(zhì)如抗菌素被廣泛地用作飼料添加劑，以促進(jìn)飼養(yǎng)的家畜、家禽和人工養(yǎng)殖的水生動(dòng)物的生長。
然而，消費(fèi)者，大眾媒介等常常提出一個(gè)嚴(yán)重的問題，即在飼養(yǎng)的家畜、家禽和人工養(yǎng)殖的水生動(dòng)物的肉中可能存有抗菌物質(zhì)的殘留物。從而，人們做了大量的關(guān)于使用抗菌物質(zhì)的研究工作，這是從給人們提供高度安全的食品的立場出發(fā)的。
另一方面，很早以來人們已經(jīng)使用含有前生命期(Probiotics)物質(zhì)的微生物組合物以保持哺乳動(dòng)物包括人類和家畜的健康。人們一般認(rèn)為這樣的組合物對(duì)于致病的細(xì)菌有對(duì)抗活性，因而認(rèn)為有用的能活的細(xì)菌的存在對(duì)于所說的組合物來說是無可爭議的。
在含有前生命期物質(zhì)的微生物組合物的情況下，考慮到蛋白質(zhì)變性，不允許將它們加熱，從而這樣的組合物不能制成有高強(qiáng)度的碎屑和小丸。如果將藏有前生命期物質(zhì)(如梭狀芽胞桿菌屬的細(xì)菌)的淀粉酶加入到含有α-淀粉(作為粘合劑)的糊狀飼料中(如用于人工養(yǎng)殖鰻鱺的飼料)，這種飼料可能會(huì)由于這種淀粉酶的作用而變質(zhì)。進(jìn)一步而言，如果該前生命期物質(zhì)是形成孢子的細(xì)菌，就需使它們進(jìn)行形成孢子處理來足以避免細(xì)菌的死亡，因此制備這樣的微生物組合物有很低的產(chǎn)率。
所以，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供生長的促進(jìn)物質(zhì)，該物質(zhì)可以安全地用于代替已知的抗菌物質(zhì)和含有前生命期的物質(zhì)的微生物組合物。
根據(jù)本發(fā)明，提供一種用于促進(jìn)動(dòng)物生長的方法，該方法包括使動(dòng)物口服梭狀芽胞桿菌屬的細(xì)菌的殺死的微生物細(xì)胞。本發(fā)明還涉及一種粉末組合物，該組合物的基本成分包括梭狀芽胞桿菌屬的細(xì)菌殺死的微生物營養(yǎng)細(xì)胞，以及糖類和/或淀粉。
作為梭狀芽胞桿菌屬的微生物，例如可能被提到的酪酸梭狀芽胞桿菌。特別優(yōu)選的是酪酸梭狀芽胞桿菌MIYAIRI(Clostridium butyricum MIYAIRI)，它作為前生命期生物制劑可從Miyarisan Co.，Ltd.，Japan購得。就所述微生物制劑來說，已經(jīng)觀察到人類和家畜長時(shí)期服用后沒有任何所不希望的副作用。
作為MIYAIRI種的一個(gè)例子，可能提到酪酸梭狀芽胞桿菌株MIYAIRI 588，它已被寄存在日本的工業(yè)科學(xué)和技術(shù)株式會(huì)社的發(fā)酵研究所(the Fermentation Research Institute of the Agency of Industrial Science & Technology of Japan)作為布達(dá)佩斯條約的一個(gè)國際寄存，所給的登記號(hào)為FERM BP-2789。
為制備這種微生物的殺死細(xì)胞所用的存活的微生物細(xì)胞，可以沒有任何限制地使用形成孢子階段的和營養(yǎng)階段的存活的細(xì)胞。優(yōu)選的是營養(yǎng)階段的存活細(xì)胞。用于培養(yǎng)這種存活的細(xì)菌的一種方法公開在美國專利4，892，731號(hào)中。
按照本發(fā)明所用的殺死的微生物細(xì)胞可以用常規(guī)的方法獲得，例如，將相應(yīng)的存活的微生物細(xì)胞進(jìn)行熱處理或用福爾馬林或其它殺菌劑處理。所述殺死的微生物細(xì)胞可以是已經(jīng)被大量殺死的。還可以使用當(dāng)被制成制劑時(shí)可被實(shí)際上殺死的存活的微生物細(xì)胞。
例如可以通過一種適宜的方法得到梭狀芽胞桿菌屬的細(xì)菌的微生物營養(yǎng)細(xì)胞。對(duì)于培養(yǎng)和分離微生物細(xì)胞的方法沒有限制。例如，有一種方法，特征是將梭狀芽胞桿菌細(xì)菌移植到一種適宜的培養(yǎng)基中如一種常規(guī)的含葡萄糖的肉湯，并且在30至40℃下培養(yǎng)14至24小時(shí)。完成上述初步培養(yǎng)之后，進(jìn)行主培養(yǎng)，也就是將在初步培養(yǎng)中得到的液體培養(yǎng)產(chǎn)物移植到具有較大規(guī)模的相似培養(yǎng)基中，并在與初步培養(yǎng)中所用的溫度和時(shí)間條件相似的條件下培養(yǎng)。完成主培養(yǎng)后，可用適當(dāng)?shù)姆绞饺缫浑x心分離器分離所培養(yǎng)成的微生物細(xì)胞。用于所述細(xì)菌的任何培養(yǎng)基沒有特別的限制。例如，可以使用用于酪酸梭狀芽胞桿菌常規(guī)的肉湯，它含有0.8%的肉汁、1%的胨和0.5%的氯化鈉。一般優(yōu)選的液體培養(yǎng)基含有葡萄糖、酵母汁和胨。
還可以實(shí)行一種在日本專利KOKOKU NO.8300/1962中描述的方法，該方法中培養(yǎng)操作進(jìn)行約14至24小時(shí)這樣相對(duì)短的時(shí)間，然后中斷該操作以獲得形成孢子階段之前的營養(yǎng)階段的微生物細(xì)胞，并收獲所述微生物細(xì)胞。
按照本發(fā)明所用的梭狀芽胞桿菌細(xì)菌的殺死的微生物營養(yǎng)細(xì)胞可以通過在空氣中將培養(yǎng)的微生物營養(yǎng)細(xì)胞過濾來獲得。如果在空氣中過濾是不夠的話，那么可以將過濾后的產(chǎn)物懸浮到存在空氣的水中。梭狀芽胞桿菌屬的細(xì)菌是專性的厭氧微生物，當(dāng)細(xì)菌的微生物營養(yǎng)細(xì)胞暴露于空氣中時(shí)將會(huì)殺死，從而得到細(xì)菌的殺死的微生物營養(yǎng)細(xì)胞。
還可以通過將相應(yīng)的存活的營養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行熱處理或用福爾馬林或其它殺菌劑處理來獲得殺死的微生物營養(yǎng)細(xì)胞。殺死的微生物細(xì)胞可以是已被大量殺死的。另外，如果當(dāng)存活的微生物細(xì)胞被制成制劑時(shí)可被大量殺死時(shí)，就可以使用存活的微生物細(xì)胞。
按照本發(fā)明，所用的殺死的微生物細(xì)胞可以是每克殺死的微生物細(xì)胞含有至少109，優(yōu)選為109-1011的微生物細(xì)胞。上述微生物細(xì)胞數(shù)是用這樣的方法來計(jì)算的，將乳化的微生物細(xì)胞懸浮在一種生理鹽水中，在顯微鏡下借助于血球計(jì)數(shù)器進(jìn)行計(jì)數(shù)操作。
按照本發(fā)明的微生物組合物，每克該組合物含有至少106，優(yōu)選為106-1011，更優(yōu)選為106-1010殺死的微生物細(xì)胞。
食用本發(fā)明的組合物的動(dòng)物是除了人類以外的那些，例如包括家畜、家禽、人工養(yǎng)殖的水生動(dòng)物等。
本發(fā)明的微生物組合物可以通過如下方法制備，培養(yǎng)微生物細(xì)胞后，將該微生物細(xì)胞進(jìn)行殺菌處理，并將所得到的殺死的微生物細(xì)胞分離和濃縮。這樣得到的殺死的微生物細(xì)胞的干粉末可以直接制成制劑。還可以將所述干粉末與按照日本的關(guān)于飼料的安全保證和質(zhì)量改進(jìn)的法律所允許的一種賦形劑混合來制成制劑，所述賦形劑如脫脂米糠、小麥粉、葡萄糖、硅石、麥糠之類。而且，可以濃縮和干燥帶有殘留物的液體培養(yǎng)產(chǎn)物，以獲得含有可將被用作本發(fā)明的組合物中的有效組分的殺死的微生物細(xì)胞的滅菌混合物。本發(fā)明的組合物可以是粉末狀、片狀、丸狀、細(xì)粒狀、膠囊等。
這樣的片劑可以用傳統(tǒng)的方法制備，可以使用賦形劑、分解劑、粘合劑、潤滑劑等。
關(guān)于賦形劑，可能提到如糖類，如乳糖、D-甘露醇、D-山梨醇和蔗糖;淀粉和谷物淀粉如土豆淀粉;和無機(jī)鹽如磷酸鈣、硫酸鈣和沉淀的碳酸鈣。
分解劑的例子為淀粉如羥丙基淀粉、羧甲基鈉淀粉和已被部分轉(zhuǎn)化成α型的淀粉;纖維素衍生物如羧基甲基纖維素鈣、羧基甲基纖維素和具有低取代度的羥丙基纖維素;和合成的高聚物如交聯(lián)的聚乙烯吡咯烷酮。
關(guān)于粘合劑，例如可使用高分子量的物質(zhì)如聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、凝膠、阿拉伯樹膠等。
潤滑劑的例子一般為天然存在物質(zhì)和它們的衍生物，如滑石、蠟、膠體二氧化硅;和脂肪酸如硬脂酸及其金屬鹽、如硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、硬脂酸鋁和蔗糖脂肪酸酯。
聚合物如Macrogol用于片劑中是適宜的。
當(dāng)本發(fā)明的組合物用于促進(jìn)動(dòng)物生長時(shí)，它們一般作為飼料和飲用水的添加劑使用。所以，在這種情況下，優(yōu)選將組合物制成粉末狀。這樣的粉末組合物可含有0.00005-80%，優(yōu)選為0.0005-70%，更優(yōu)選為0.01至50%的含有梭狀芽胞桿菌屬的細(xì)菌的殺死的微生物細(xì)胞的粉末，其余部分用載體平衡。
至于本發(fā)明的組合物，可以說所優(yōu)選的組合物不僅含有殺死的微生物營養(yǎng)細(xì)胞，而且還含有糖類和/或淀粉，因?yàn)檫@類優(yōu)選的組合物的生長促進(jìn)活性是相當(dāng)高的。這樣，優(yōu)選的粉末組合物含有梭狀芽胞桿菌屬的細(xì)菌的殺死的微生物營養(yǎng)細(xì)胞以及糖類和/或淀粉。
關(guān)于含有殺死的微生物細(xì)胞的粉末組合物中所用的糖類，可以使用任何糖類，例如包括葡萄糖、果糖、蔗糖、低聚糖、乳糖等，優(yōu)選的是乳糖。
關(guān)于淀粉，可使用任何淀粉，如小麥淀粉、土豆淀粉和谷物淀粉，優(yōu)選的是谷物淀粉。
每克含有殺死的微生物營養(yǎng)細(xì)胞的粉末應(yīng)含有至少109個(gè)，優(yōu)選為109-1011個(gè)的微生物細(xì)胞。
本發(fā)明的含有梭狀芽胞桿菌屬的細(xì)菌的殺死的微生物營養(yǎng)細(xì)胞的粉末組合物的制備可通過如下方法進(jìn)行，即將含有殺死的微生物細(xì)胞的粉末與粉末狀的糖類或淀粉摻和，以形成均勻的混合物。另一種方法包括將以殺死的微生物細(xì)胞為主的濕物質(zhì)與糖類或淀粉混合以形成混合物，然后將該混合物干燥和粉碎。為操作簡便起見，優(yōu)選將殺死的微生物細(xì)胞與糖類和/或淀粉摻合以形成混合物，然后將該混合物懸浮在水中。將所得到的懸浮液進(jìn)行噴霧干燥操作，其中熱空氣的入口溫度在120和200℃之間，優(yōu)選在130和170℃之間，出口溫度在30和150℃之間，優(yōu)選在50和100℃之間。至于所加的糖類和淀粉的量，一般來說每份重量的梭狀芽胞桿菌細(xì)菌的殺死的微生物營養(yǎng)細(xì)胞加入糖類0.04和700份(重量)，優(yōu)選為0.1和70份(重量)之間，而淀粉的加入量為0.2和700份(重量)，優(yōu)選為0.4和70份(重量)之間。在噴霧干燥操作情況下，顯然如果使用生理上允許的難溶于水的無機(jī)物如碳酸鈣等作為添加劑，更容易進(jìn)行所述操作。以上述基本組分的總量計(jì)，所述加入的無機(jī)物的量為0.005和0.5份，優(yōu)選為0.01和0.2份，更優(yōu)選為0.01和0.1份(重量)之間。
用上述方法制得的含有梭狀芽胞桿菌細(xì)菌的殺死的微生物營養(yǎng)細(xì)胞的粉末組合物一般含有0.05-80%，優(yōu)選0.5-70%，更優(yōu)選5-50%以梭狀芽胞桿菌細(xì)菌的殺死的微生物細(xì)胞的粉末基準(zhǔn)，1-50%，優(yōu)選3-40%，更優(yōu)選5-30%的糖類，和15-90%，優(yōu)選25-80%，更優(yōu)選35-75%的淀粉。所述粉末組合物可含有至少109個(gè)，優(yōu)選109-1011個(gè)，更優(yōu)選109-1010個(gè)的殺死的微生物細(xì)胞。在組合物還含有無機(jī)物的情況下，無機(jī)物的含量一般在0.5和50%之間，優(yōu)選在1和20%之間，更優(yōu)選在1和10%之間。
還可以將賦形劑加到所述粉末組合物中。作為可被提到的所用的賦形劑，例如按照日本的關(guān)于飼料的安全保證和質(zhì)量改進(jìn)的法律所允許的任何賦形劑，包括脫脂米糠、大豆粉末、糖屑、谷殼粉末、碳酸鈣、糖類、淀粉類、啤酒酵母和麥糊?？梢允褂萌我环N賦形劑或至少兩種賦形劑。每份重量的上述粉末組合物(重量)，所加入的賦形劑的量一般在0.01和1000份(重量)之間，優(yōu)選0.1和800份(重量)之間，更優(yōu)選1和500份(重量)之間。就含有賦形劑的粉末組合物來說，每克組合物所含的殺死的微生物細(xì)胞的數(shù)目一般至少約106個(gè)，優(yōu)選在106和1011個(gè)之間，更優(yōu)選在106和1010個(gè)之間。
含賦形劑的粉末組合物一般含有0.00005-80%，優(yōu)選0.0005-70%，更優(yōu)選0.01至25%的基于梭狀芽胞桿菌細(xì)菌的殺死的微生物營養(yǎng)細(xì)胞的粉末，0.001至50%，優(yōu)選0.003-40%，更優(yōu)選0.01-15%的糖類，0.015-90%，優(yōu)選0.03-80%，更優(yōu)選0.05-40%的淀粉，和1-99.9%，優(yōu)選10-99.8%，更優(yōu)選50-99.7%的賦形劑。如果上述粉末組合物是通過噴霧干燥操作制備的，還含有無機(jī)物，無機(jī)物的適宜量在0.0005和33%之間，優(yōu)選在0.001和15%之間，更優(yōu)選在0.002和5%之間。
當(dāng)使用糖類、淀粉或無機(jī)物作為賦形劑時(shí)，組合物中賦形劑的量如下0.001-99.9%，優(yōu)選為0.003-99.8%，更優(yōu)選為0.01-99.7%的糖類，0.015-99.9%，優(yōu)選0.03-99.8%，更優(yōu)選0.05-99.7%的淀粉，和0.0005-99.9%，優(yōu)選0.001-99.8%，更優(yōu)選0.002-99.7%的無機(jī)物。
本發(fā)明的組合物可以加入諸如流動(dòng)性改進(jìn)劑、抗凝結(jié)劑、抗分散劑等的添加劑。
雖然本發(fā)明的組合物通常加到家畜、家禽或人工養(yǎng)殖的水生動(dòng)物的飼料或飲用水中，本發(fā)明的組合物也可以施加到動(dòng)物體中。如果需要，可以連續(xù)食用，通常1個(gè)月至幾年的時(shí)間。
要服用的動(dòng)物的例子是家畜如牛、豬、馬和羊;家禽如小雞、母雞、鵪鶉、鴨、家養(yǎng)的鴨、雉和火雞;和人工養(yǎng)殖的水生動(dòng)物如黃尾、海魚(sea-bram)、海豚、金槍魚、大菱鲆、馬鮐魚、鮭、鯉魚、鰻鱺、彩虹真鱒、淡水真鱒、龍蝦類如對(duì)蝦、小龍蝦、龍蝦屬龍蝦和黑虎(black tiger)，以及蟹類如擬石蟹屬、Chionoecetes和Erimacrus。
當(dāng)將組合物加到飼料中時(shí)，所加的組合物的量為使每克飼料含微生物細(xì)胞的數(shù)目至少約104個(gè)，優(yōu)選為約104和107個(gè)之間，更優(yōu)選為約104和106個(gè)之間。例如，當(dāng)使用不含賦形劑的組合物時(shí)，所加的組合物的量可為至少0.1ppm，優(yōu)選在0.1和1000ppm之間，更優(yōu)選在0.1和100ppm之間。當(dāng)使用含賦形劑的組合物時(shí)，組合物的量可至少為0.001%(wt)，優(yōu)選在0.01和10%(wt)之間，更優(yōu)選為在0.1和0.5%(wt)之間。
當(dāng)組合物加到飲用水時(shí)，所加的組合物的量為每毫升飲用水含微生物細(xì)胞數(shù)目至少約104個(gè)，優(yōu)選為約104和107個(gè)之間，更優(yōu)選在約104和106個(gè)之間。例如，當(dāng)所用組合物不含賦形劑時(shí)，所加入的組合物的量一般為至少0.05ppm，優(yōu)選在0.05和500ppm之間，更優(yōu)選在0.05和50ppm之間。當(dāng)使用含有賦形劑的組合物時(shí)，所加的組合物的量一般至少0.0005%，優(yōu)選在0.005%和5%之間，更優(yōu)選在0.05和0.5%之間。
本發(fā)明及其效果將由下面的試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步闡明。
試驗(yàn)1-1彩虹真鱒的生長試驗(yàn)?zāi)康臑榱擞^察生長促進(jìn)效應(yīng)，進(jìn)行一些試驗(yàn)，將酪酸梭狀芽胞桿菌MIYAIRI的死的微生物細(xì)胞加入到彩虹真鱒的飼料中。
試驗(yàn)方法樣品使用每克飼料加入105酪酸梭狀芽胞桿菌MIYAIRI的殺死的微生物細(xì)胞而制成的飼料。
步驟彩虹真鱒(rainbow trouts)的平均體重為每只20g;將它們飼養(yǎng)40天，使每組彩虹真鱒的數(shù)目為525只。
試驗(yàn)結(jié)果示于表1中。
表1彩虹真鱒的生長試驗(yàn)組 每日體重增加 飼料效率(g/魚/天)
使用殺死的微生 0.23(110) 0.73(106)物細(xì)胞使用存活的微 0.21(100) 0.69(100)生物細(xì)胞對(duì)比 0.21(100) 0.69(100)注釋括號(hào)中的數(shù)是基于對(duì)比組中得到的值為100時(shí)的相應(yīng)的指數(shù)。
如表1所示，觀察到酪酸梭狀芽胞桿菌MIYAIRI的殺死的微生物細(xì)胞顯示出對(duì)彩虹真鱒有促進(jìn)生長效果。
試驗(yàn)1-2老鼠生長試驗(yàn)?zāi)康臑榱擞^察酪酸梭狀芽胞桿菌MIYAIRI的殺死的微生物細(xì)胞的生長促進(jìn)效果，進(jìn)行下面的試驗(yàn)，將殺死的微生物細(xì)胞加到老鼠的飼料中。
樣品使用每克飼料加入105個(gè)或107個(gè)的酪酸梭狀芽胞桿菌MIYAIRI的殺死的微生物細(xì)胞而制成的飼料。
試驗(yàn)步驟SPF鼠，平均體重為每只25克，飼養(yǎng)28天增重，每組鼠數(shù)為10。
試驗(yàn)結(jié)果示于表2中。
表2老鼠生長試驗(yàn)組 體重增加使用每克含105殺死 3.80g(129)的微生物細(xì)胞使用每克含107殺死 4.50(153)的微生物細(xì)胞對(duì)比 2.95(100)注釋括號(hào)中的數(shù)為基于對(duì)比組所得到的值為100相應(yīng)的指數(shù)。
如表2所示，觀察到酪酸梭狀芽胞桿菌MIYAIRI的殺死的微生物細(xì)胞對(duì)老鼠有促進(jìn)生長效果。
試驗(yàn)1-3小雞生長試驗(yàn)?zāi)康臑榱擞^察酪酸梭狀芽胞桿菌MIYAIRI的殺死的微生物細(xì)胞的生長促進(jìn)效果，進(jìn)行下面的試驗(yàn)，將殺死的微生物細(xì)胞加入到小雞的飼料中。
樣品使用每克飼料含106酪酸梭狀芽胞桿菌MIYAIRI的殺死的微生物細(xì)胞而制成的飼料。
試驗(yàn)步驟將平均體重為每只40g的小雞飼養(yǎng)28天增重，每組小雞數(shù)目為20。
試驗(yàn)結(jié)果示于表3中。
表3小雞的生長試驗(yàn)體重增加 飼料轉(zhuǎn)化使用殺死的微生物 882g(104) 1.57(98)細(xì)胞的組對(duì)比組 846g(100) 1.61(100)
注釋括號(hào)內(nèi)的數(shù)是基于對(duì)比組中得到的值為100所相應(yīng)的指數(shù)。
如表3所示，觀察到酪酸梭狀芽胞桿菌MIYAIRI對(duì)小雞有促進(jìn)生長效果。
試驗(yàn)1-4人工養(yǎng)殖的鰻鱺的飼料的變質(zhì)試驗(yàn)(即，飼料在水中的所不希望的消散試驗(yàn))目的進(jìn)行下面的試驗(yàn)，以觀察加入以酪酸梭狀芽胞桿菌MIYAIRI的存活的或殺死的微生物細(xì)胞為基質(zhì)的粉末后，人工養(yǎng)殖鰻鱺的飼料是否出現(xiàn)變質(zhì)試驗(yàn)步驟如表4所示，將100g飼料放入一燒杯中，并與120克水混合并揉和以制成一種象飼料糕的混合物，然后在30℃下靜置10分鐘，再制成團(tuán)狀樣品，每個(gè)樣品重10克。每個(gè)團(tuán)狀樣品含有每克樣品約105酪酸梭狀芽胞桿菌MIYAIRI的微生物細(xì)胞。
表4樣品的組成對(duì)比組 使用存活的 使用殺死的細(xì)菌組 細(xì)菌組魚粉 80% 80% 80%轉(zhuǎn)化成α-型的淀粉 20% 19 19存活的細(xì)菌 - 1 -死的細(xì)菌 - - 1將每個(gè)樣品放入一體積為300毫升的錐形瓶中，與100ml水混合，并且用設(shè)置有加熱裝置的振動(dòng)器振動(dòng)30分鐘。振動(dòng)后，將樣品靜置5分鐘，然后分離出上層清液。用一分光光度計(jì)在660mμ的波長下測定上層清液的透光度。每個(gè)樣品測量5次，記下平均測定值。
試驗(yàn)結(jié)果示于表5中。
表5鰻鱺飼料的變質(zhì)試驗(yàn)(水中的消散試驗(yàn))對(duì)比組 使用存活的細(xì)菌組 使用殺死的細(xì)菌組透光度 56.5 31.8 57.6(100) (56) (102)注釋括號(hào)內(nèi)的數(shù)為基于對(duì)比組中得到的值為100時(shí)相應(yīng)的指數(shù)從表5中觀察到，當(dāng)使用殺死的微生物細(xì)胞代替存活的微生物細(xì)胞(制成飼料)時(shí)，加入存活的微生物細(xì)胞的飼料在水中的所不希望的消散受到抑制。
試驗(yàn)2-1小雞的生長試驗(yàn)(1)樣品按本發(fā)明的樣品表示于實(shí)施例2-3中的殺死的微生物組合物(微生物細(xì)胞數(shù)8.7×1010/g)參考樣品示于參考實(shí)施例中的只含有殺死的微生物營養(yǎng)細(xì)胞的粉末(微生物細(xì)胞數(shù)5×1011/g)。
(2)試驗(yàn)步驟飼養(yǎng)Arbor Acres種的小雞，小雞體重為約44g，每組的雞數(shù)為20(即10只雄的和10只雌的)，而且每種試驗(yàn)重復(fù)做三次。用小雞飼料飼養(yǎng)小雞增重，所述飼料不含任何抗菌素和抗菌物質(zhì)，上述樣品飼料每克含有(4.4至4.5)×105的微生物細(xì)胞。生長試驗(yàn)進(jìn)行4周。再者，在對(duì)比組中，用不含上述樣品的飼料飼養(yǎng)小雞。
(3)試驗(yàn)結(jié)果示于下面給出的表中。
表小雞生長試驗(yàn)組 體重增加 飼料轉(zhuǎn)化對(duì)比 845g(100) 1.85(100)使用參考樣 864g(102) 1.85(100)使用本發(fā)明 884g(105) 1.81(98)的樣品如表1-1至1-4所示，酪酸梭狀芽胞桿菌MIYAIRI的殺死的微生物細(xì)胞對(duì)家畜、家禽和人工養(yǎng)殖的水生動(dòng)物有促進(jìn)生長效果，因此可用于生產(chǎn)高度安全的食用肉類和人工養(yǎng)殖的水生動(dòng)物。不象存活的微生物細(xì)胞，對(duì)于飼料的制備沒有限制。特別是，應(yīng)當(dāng)指出，本發(fā)明相對(duì)于使用存活的微生物細(xì)胞的效果是顯著的，因?yàn)闅⑺赖奈⑸矬w加到人工養(yǎng)殖的水生動(dòng)物的飼料中不會(huì)使飼料加快變質(zhì)。
進(jìn)一步而言，由試驗(yàn)2-1的結(jié)果，我們可以說，本發(fā)明的含有酪酸梭狀芽胞桿菌MIYAIRI的殺死的微生物營養(yǎng)細(xì)胞以及糖類和/或淀粉的粉末組合物，比只含有所述細(xì)菌的殺死的微生物細(xì)胞的相應(yīng)的粉末組合物有高得多的生長促進(jìn)效應(yīng)。因此，本發(fā)明的組合物對(duì)于增加家畜、家禽和水生動(dòng)物的生產(chǎn)率是有效的。
本發(fā)明將通過下面給出的實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)地闡述。
實(shí)施例1-1粉末組合物的配制脫脂米糠 96g大豆油 3g含有酪酸梭狀芽胞桿菌 1gMIYAIRI的殺死的微生物細(xì)胞的粉末(每克含1010個(gè)殺死的微生物細(xì)胞)上述組分相互混合以制備一種粉末組合物。
實(shí)施例1-2丸劑的制備脫脂米糠 70g麥糊 28.9g含有酪酸梭狀芽胞桿菌 1gMIYAIRI的殺死的微生物細(xì)胞的粉末(每克含1010個(gè)殺死的微生物細(xì)胞)聚丙烯酸鈉 1g這些組分相互混合，用丸劑成形機(jī)將所得的混合物制成丸劑。
實(shí)施例1-3
片劑的制備含有酪酸梭狀芽胞桿菌MIYAIRI的微生物細(xì)胞(每克含1010個(gè)殺死的微生物細(xì)胞)的1份粉末與80份乳糖、20份谷物淀粉、20份取代度低的羥丙基纖維素，和2份聚乙烯吡咯烷酮均勻混合并形成顆粒，然后與0.5份硬脂酸鎂混合。再進(jìn)行片劑成形操作。
實(shí)施例1-4細(xì)顆粒的制備含有酪酸梭狀芽胞桿菌MIYAIRI的殺死的微生物細(xì)胞(每克含1010個(gè)殺死的微生物細(xì)胞)與85份甘露醇、15份羧基甲基纖維素和2.5份羥丙基纖維素均勻混合，然后制成細(xì)顆粒。
實(shí)施例2-1將一種保藏的細(xì)菌，酪酸梭狀芽胞桿菌MIYAIRI株588(FERM BP-2789)在37℃下在下述的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。16小時(shí)后，將液體培養(yǎng)物進(jìn)行離心分離操作以得到微生物營養(yǎng)細(xì)胞。
胨 1%酵母汁 1%葡萄糖 1%將如此得到的微生物細(xì)胞100g，谷物淀粉110g，乳糖50g，碳酸鈣8g懸浮在1升水中。用噴霧干燥器將所得到的懸浮液立即進(jìn)行噴霧干燥操作，其中熱空氣的入口溫度在140和160℃之間，出口溫度在70和95℃之間，從而得到含有殺死的微生物營養(yǎng)細(xì)胞的本發(fā)明的粉末組合物。
實(shí)施例2-2
將300g含有酪酸梭狀芽胞桿菌MIYAIRI的殺死的微生物營養(yǎng)細(xì)胞的粉末與100g乳糖和600g谷物淀粉在一個(gè)V型混合器中混合以得到本發(fā)明的粉末組合物。
實(shí)施例2-3將含有用與下述參照實(shí)施例相似的方法得到的酪酸梭狀芽胞桿菌MIYAIRI的殺死的微生物營養(yǎng)細(xì)胞的粉末5.15kg與2kg乳糖、13kg谷物淀粉和1kg碳酸鈣在適量的水中乳化。將所得到的乳狀液與附加量的水混合，使乳狀液的體積增加到100升。然后用噴霧干燥器進(jìn)行噴霧干燥操作以得到本發(fā)明的粉末組合物。
實(shí)施例2-4將含有酪酸梭狀芽胞桿菌MIYAIRI的殺死的微生物營養(yǎng)細(xì)胞的粉末2.5kg與0.5kg乳糖、7kg谷物淀粉和90kg啤酒酵母在一轉(zhuǎn)鼓型混合器中混合以得到本發(fā)明的粉末組合物。
實(shí)施例2-5將5克實(shí)施例2-1所示的噴霧干燥的產(chǎn)品與85克啤酒酵母和10克脫脂米糠均勻混合以得到本發(fā)明的組合物。
參照例將一種保藏的細(xì)菌，即酪酸梭狀芽胞桿菌MIRAIRI種588(FERMBP2789)在37℃在下述的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。16小時(shí)后，將液體培養(yǎng)物進(jìn)行離心分離操作以得到微生物營養(yǎng)細(xì)胞。
胨 1%酵母汁 1%葡萄糖 1%
將這樣得到的微生物細(xì)胞100g懸浮在350ml的水中。在-30℃下，將該懸浮液進(jìn)行初步冷凍操作，然后進(jìn)行常規(guī)的冷凍干燥操作以得到含殺死的微生物營養(yǎng)細(xì)胞的干粉末。
權(quán)利要求
1.一種用于促進(jìn)動(dòng)物生長的方法，該方法包括使動(dòng)物食用梭狀芽胞桿菌屬的細(xì)菌的殺死的微生物細(xì)胞。
2.按權(quán)利要求1的方法，其特征在于所述梭狀芽胞桿菌屬的細(xì)菌是酪酸梭狀芽胞桿菌屬的細(xì)菌。
3.按權(quán)利要求2的方法，其特征在于所述酪酸梭狀芽胞桿菌屬為酪酸梭狀芽胞桿菌MIYAIRI。
4.按權(quán)利要求1的方法，其特征在于殺死的微生物細(xì)胞為殺死的微生物營養(yǎng)細(xì)胞。
5.按權(quán)利要求1的方法，其特征在于通過將殺死的微生物細(xì)胞加到飼料中使動(dòng)物食用殺死的微生物細(xì)胞。
6.按權(quán)利要求5的方法，其特征在于飼料中殺死的微生物細(xì)胞數(shù)為每克飼料至少104個(gè)。
7.按權(quán)利要求1的方法，其特征在于所述動(dòng)物是家畜、家禽或飼養(yǎng)的水生動(dòng)物。
8.一種粉末組合物，含有作為基本成分的梭狀芽胞桿菌屬的細(xì)菌的殺死的微生物營養(yǎng)細(xì)胞，以及糖類和/或淀粉。
9.按權(quán)利要求8的組合物，其特征在于梭狀芽胞桿菌屬的細(xì)菌是酪酸梭狀芽胞桿菌屬的細(xì)菌。
10.按權(quán)利要求9的組合物，其特征在于酪酸梭狀芽胞桿菌屬的細(xì)菌是酪酸梭狀芽胞桿菌MIYAIRI。
11.按權(quán)利要求8的組合物，其特征在于殺死的微生物營養(yǎng)細(xì)胞數(shù)為每克組合物至少106個(gè)。
12.按權(quán)利要求8的組合物，其特征在于殺死的微生物營養(yǎng)細(xì)胞數(shù)為每克組合物106和1011個(gè)之間。
13.按權(quán)利要求8的組合物，其特征在于所述糖類為葡萄糖、果糖、蔗糖、低聚糖或乳糖，而所述淀粉為小麥淀粉、土豆淀粉或谷物淀粉。
14.按權(quán)利要求8的組合物，其特征在于所述組合物每份(重量)的梭狀芽胞桿菌屬的殺死的微生物營養(yǎng)細(xì)胞含有0.04-700份(重量)的糖類和/或0.2-700份(重量)的淀粉。
15.按權(quán)利要求8的組合物，其特征在于所述組合物含有0.00005-80W/W%的酪酸梭狀芽胞桿菌MIYAIRI的殺死的微生物營養(yǎng)細(xì)胞、0.001-50W/W%的糖類、0.015-90W/W%的淀粉、0.0005-33W/W%的難溶于水的無機(jī)物，和1-99.9W/W%的賦形劑，和其中殺死的微生物營養(yǎng)細(xì)胞數(shù)為每克組合物至少106個(gè)。
16.按權(quán)利要求15的組合物，其特征在于所述糖類為乳糖，而難溶于水的無機(jī)物為碳酸鈣。
17.一種用于制備含有梭狀芽胞桿菌屬的細(xì)菌的殺死的微生物細(xì)胞的粉末組合物的制備方法，該方法包括下述步驟將梭狀芽胞桿菌屬的細(xì)菌的微生物營養(yǎng)細(xì)胞的粉末以及糖類和/或淀粉懸浮在水中;將如此獲得的懸浮液進(jìn)行噴霧干燥操作。
18.一種促進(jìn)動(dòng)物生長的組合物，該組合物包括作為有效成分的梭狀芽胞桿菌屬細(xì)菌的殺死的微生物細(xì)胞。
19.按權(quán)利要求18的組合物，其特征在于所述殺死的微生物細(xì)胞為殺死的微生物營養(yǎng)細(xì)胞。
20.按權(quán)利要求18的組合物，其特征在于所述梭狀芽胞桿菌屬的細(xì)菌為酪酸梭狀芽胞桿菌屬的細(xì)菌。
21.按權(quán)利要求20的組合物，其特征在于酪酸梭狀芽胞桿菌為酪酸梭狀芽胞桿菌MIYAIRI。
22.一種用于促進(jìn)動(dòng)物生長的組合物，該組合物包括0.00005-80%的含有梭狀芽胞桿菌屬的細(xì)菌的殺死的微生物細(xì)胞的粉末，其余部分為載體。
23.按權(quán)利要求22的組合物，其特征在于殺死的微生物細(xì)胞為殺死的微生物營養(yǎng)細(xì)胞。
24.按權(quán)利要求21的組合物，其特征在于組合物含0.01-50%的梭狀芽胞桿菌屬的細(xì)菌的殺死的微生物細(xì)胞的粉末。
25.按權(quán)利要求22的組合物，其特征在于梭狀芽胞桿菌屬的細(xì)菌為酪酸梭狀芽胞桿菌種的細(xì)菌。
26.按權(quán)利要求25的組合物，其特征在于酪酸梭狀芽胞桿菌種的細(xì)菌為酪酸梭狀芽胞桿菌MIYAIRI。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種用于促進(jìn)動(dòng)物生長的方法，該方法包括使動(dòng)物食用梭狀芽胞桿菌屬的細(xì)菌和殺死的微生物細(xì)胞，而且還提供一種粉末組合物，該組合物包括作為基本組分的梭狀芽胞桿菌屬的細(xì)胞的殺死的微生物營養(yǎng)細(xì)胞，以及糖類和/或淀粉。
文檔編號(hào)A61K35/74GK1075636SQ92115398
公開日1993年9月1日 申請(qǐng)日期1992年12月11日 優(yōu)先權(quán)日1991年12月11日
發(fā)明者河野和已, 水飼康之, 水落一雄, 淺野猛, 村山隆一, 北城俊男, 田中守 申請(qǐng)人:日本化藥株式會(huì)社, 妙利散株式會(huì)社