專利名稱：基于牡蠣、扇貝制備硫酸化糖原的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥品基料的制備，更具體地說，涉及一種能提高免疫力的硫酸化糖原的制備。
背景技術(shù)：
在醫(yī)療以及保健品的應(yīng)用中，如何提聞肌體免疫力是治療癌癥、提聞抗病毒等能力的關(guān)鍵性因素。但是現(xiàn)有保健品藥品要么組成復(fù)雜，對人體健康具有相當(dāng)毒性，要么雖屬于天然提取物，但價格昂貴效果不顯著。如何通過低成本廉價的方式制備出具有提高免疫力的保健品藥品是目前人們迫切需要的。硫酸化多糖是一種天然的提高免疫力、抗病毒、抗癌癥、抗凝血的化合物(栗衍華，2006)。但近年來多數(shù)研究開發(fā)的天然提取硫酸化多糖比較稀少，提取效率低下，如海帶硫酸多糖粗品提取率約為1.56% (田翠玲，2011)，導(dǎo)致價格昂貴；而經(jīng)過提取后改造的人工硫酸化修飾多糖得率則更為低下，不易獲得，而且人工合成硫酸化多糖一般結(jié)構(gòu)組成復(fù)雜無法清楚說明其有效成分，無法有效控制其產(chǎn)品品質(zhì)。扇貝貝柱產(chǎn)品價格低廉易得，天然無毒，糖原的分子結(jié)構(gòu)簡潔清晰，且其糖原含量達(dá)到干基的20%以上，實(shí)驗(yàn) 證明硫酸化修飾后其提高免疫力、抗菌、抗炎、抗凝血的生理活性非常強(qiáng)。是理想的制備提高人體免疫力的天然制劑材料。關(guān)于扇貝多糖，現(xiàn)公開的加工方法較多，但都屬于利用扇貝內(nèi)臟廢棄物提取的雜多糖，其結(jié)構(gòu)成分還需進(jìn)一步闡明，例如:2006年3月15日公開的申請?zhí)枮?00410035656.3的中國發(fā)明專利，申請公開說明的“櫛孔扇貝糖胺聚糖的提取制備方法”其特征在于櫛孔扇貝勻漿，蛋白酶提取醇沉提取，活性炭處理等步驟得到有血管保護(hù)效應(yīng)的糖胺聚糖。以及2010年I月6日公開的申請?zhí)枮?00910130448.4中國發(fā)明專利，申請公開說明的“一種具殺菌活性的櫛孔扇貝肽聚糖識別蛋白的制備及應(yīng)用”其特征在于利用體外重組表達(dá)技術(shù)獲得了櫛孔扇貝肽聚糖識別蛋白Cf-PGRP,具有廣譜性的殺菌效果，在開發(fā)廣譜抗菌類藥物、免疫增強(qiáng)劑和飼料添加劑等方面具有潛在應(yīng)用價值。另有多項(xiàng)專利皆為描述從扇貝內(nèi)臟提取多糖，但這些專利的目標(biāo)提取物都是從扇貝廢棄物內(nèi)臟中提取，扇貝內(nèi)臟中具有貝毒成分，必須小心處理，所以增加了扇貝內(nèi)臟多糖的提取難度，且不易進(jìn)行質(zhì)量控制，另外扇貝內(nèi)臟多糖的結(jié)構(gòu)具有微不均一性，這些都會影響所提取產(chǎn)物的最終產(chǎn)品活性及質(zhì)量。鑒于扇貝價廉易得，扇貝貝柱糖原含量較高達(dá)到20%左右，且糖原的結(jié)構(gòu)清晰，存在穩(wěn)定。因此，如何能充分利用扇貝糖原，最大程度的從中提取糖原，并經(jīng)修飾后得到具有明顯活性的產(chǎn)物，用作保健品藥品的開發(fā)是一項(xiàng)值得深入研究的技術(shù)。此外，牡蠣產(chǎn)品價格低廉易得，天然無毒，糖原的分子結(jié)構(gòu)簡潔清晰，且其糖原含量達(dá)到30%以上，硫酸化修飾后其抗病毒、提高免疫力、抗凝血的生理活性非常強(qiáng)。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，牡蠣糖原硫酸化修飾后硫酸基官能團(tuán)會定位修飾在葡萄糖殘基的C-6位點(diǎn)，是最有利于發(fā)揮其活性的修飾分子位點(diǎn)。經(jīng)過體外小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)的研究發(fā)現(xiàn)，此修飾糖原可以提高小鼠淋巴細(xì)胞增殖70%以上。是理想的制備提高人體免疫力制劑的天然材料?，F(xiàn)公開的牡蠣糖原加工方法有:2004年4月7日公開的授權(quán)公告號:CN1204832C中國發(fā)明專利申請公開說明的“一種牡蠣提取物及其制備方法”其特征在于制備過程包括乙醇處理、水提取、固液分離、調(diào)節(jié)PH值沉淀分離蛋白質(zhì)、脫除電解質(zhì)、脫色、真空濃縮、噴霧干燥等。以及2004年12月15日公開的授權(quán)公告號:CN1242699C中國發(fā)明專利申請公開說明的“牡蠣的綜合開發(fā)和應(yīng)用”其特征在于牡蠣經(jīng)熱水蒸煮溶出糖原，離心得到上清液和沉淀(牡蠣渣)。上清液用濃度為20%-95%的酒精進(jìn)行處理，離心所得沉淀進(jìn)行干燥，即制得糖原產(chǎn)品。此兩項(xiàng)專利目標(biāo)產(chǎn)品都是制備牡蠣糖原產(chǎn)品，且使用的是熱水提取方式，熱水提取方式的優(yōu)點(diǎn)在于可以有效降低成本，但是缺點(diǎn)是提取率低，浪費(fèi)大量原料。且糖原本身并不具備很強(qiáng)烈的生理功能，不能用于作為保健品藥品的開發(fā)利用。因此，如何能充分利用牡蠣糖原，最大程度的從中提取適宜糖原，并修飾用作保健品藥品的開發(fā)是一項(xiàng)值得深入研究的課題。

發(fā)明內(nèi)容

針對上述問題，本發(fā)明提供了一種廉價易得、效果顯著，能夠提高免疫力、抗癌、抗病毒、抗凝血的硫酸化糖原產(chǎn)品。此產(chǎn)品具有高效的生理活性、清楚的組成成分，并且可以很方便的生產(chǎn)及控制產(chǎn)品品質(zhì)。本發(fā)明方法具有得率高、成本低、產(chǎn)品活性穩(wěn)定性突出的特點(diǎn)。為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供一種基于牡蠣、扇貝制備硫酸化糖原的方法，包括如下步驟:S1、取牡蠣或扇貝冷凍干燥至水分質(zhì)量含量O 10%，攪拌粉碎成粉末，以粉末加水制備漿液；或者取鮮牡蠣或扇貝直接加水，勻漿獲得漿液；所述漿液中固態(tài)物質(zhì)量應(yīng)占總質(zhì)量的0.1% 5%(固態(tài)物可以叫固形物或者溶質(zhì)，把水蒸出后剩下的物質(zhì)就是固形物);S2、利用所述漿液獲得牡蠣糖原或扇貝糖原；S3、制備硫酸化試劑；S4、利用所述硫酸化試劑對所述扇貝或牡蠣糖原進(jìn)行硫酸化修飾。一種優(yōu)選方式下，所述步驟S2包括如下工序:S21、所述漿液中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1% 10%的胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、堿性蛋白酶、酸性蛋白酶、糜蛋白酶、鏈酶蛋白酶中的一種；調(diào)節(jié)pH值至所用酶的適宜環(huán)境，20 50°C酶解0.5 10小時；S22、80 100°C 滅酶 5-30 分鐘；S23、冷卻后調(diào)pH值至中性；S24、離心或者過濾去沉淀，留用上清液；S25、所述上清液加入乙醇使乙醇終濃度達(dá)到體積比50% 90%進(jìn)行醇沉沉淀；
0.5 24小時后傾去上清液，收集沉淀，即為相應(yīng)的扇貝糖原或牡蠣糖原。其中，上述步驟S21中適宜酶解的環(huán)境分別為:所述胃蛋白酶pHl 3、木瓜蛋白酶pH5 9、胰蛋白酶pH7 9、堿性蛋白酶pH8 11或、酸性蛋白酶pHl 3、糜蛋白酶pH8 9、鏈酶蛋白酶pH7 8。另一種優(yōu)選方式下，所述步驟S2包括如下工序:所述漿液加熱煮沸1-10小時，冷卻后過濾或者離心，棄去沉淀；上清液加入乙醇使乙醇終濃度達(dá)到體積比50% 90%，棄去乙醇沉淀后的上清液，醇沉沉淀部分即為扇貝糖原或牡蠣糖原。此外，一種優(yōu)選方式下，所述步驟S3的具體工序?yàn)?按照溶劑體積與溶質(zhì)質(zhì)量比5 50ml:lg的比例將溶劑吡啶或者二甲基甲酰胺溶劑與溶質(zhì)三氧化硫-吡啶互溶，制備硫酸化試劑。另一優(yōu)選方式下，步驟S3的具體工序?yàn)?在0 10°C下按照0.5 5:1比例將氯磺酸滴加到吡啶中，以0.5 2小時內(nèi)均勻滴加完畢，制得硫酸化試劑。此后，所述步驟S4包括如下工序:S41、以吡啶或二甲基甲酰胺作為溶劑將所述扇貝糖原或牡蠣糖原配制成濃度10 500mg/ml的糖原溶液；S42、所述硫酸化試劑加入所述糖原溶液，兩種溶液的體積比例為1:5 5:1 ;S43、在攪拌的情況下沸水浴反應(yīng)0.5 2小時；S44、以冰鹽浴將反應(yīng)液溫度降低到0 10°C ;S45、用 1-6M 的 NaOH 或 KOH 調(diào)節(jié)到 pH7 8 ;S46、用3 IOkDa孔徑的半透膜或者工業(yè)陶瓷膜作為超濾工具，自來水超濾4 72小時，產(chǎn)物溶液為硫酸化糖原溶液；或者選用透析方法，以分子大小為3kDa IOkDa孔徑的透析袋扎緊，自來水透析4 72小時，袋內(nèi)溶液為硫酸化糖原溶液。最優(yōu)方式下，上述制得的硫酸化糖原溶液經(jīng)過冷凍干燥或噴霧干燥的方法得到硫酸化扇貝或硫酸化牡蠣糖原粉。本發(fā)明利用扇貝、牡蠣提取扇貝、牡蠣糖原，并在扇貝、牡蠣糖原基礎(chǔ)上進(jìn)行硫酸基的修飾。得到具有提高免疫力，抗炎、抗凝血、抗病毒能力的硫酸化扇貝、牡蠣糖原。此硫酸化扇貝、牡蠣糖原可以作為保健品藥品的基料生產(chǎn)。其產(chǎn)品分子結(jié)構(gòu)組成明確、便于控制產(chǎn)品品質(zhì)，無毒無害，具有非常高的生理活性且成本低廉便于生產(chǎn)。其制備的主要步驟包括1、扇貝、牡蠣的前處理。2、扇貝、牡蠣糖原的制備包括蛋白酶提取或者沸水提取，采用乙醇醇提的方式得到扇貝、牡蠣糖原。3、硫酸化試劑的制備，包括三氧化硫-吡啶試劑或氯磺酸-批唳試劑的制備。4、采用三氧化硫-批唳或者氯磺酸-批唳的方法制備硫酸化的扇貝、牡蠣糖原。5、采用膜技術(shù)徹底去除修飾后的試劑殘留。制備的硫酸化扇貝、牡蠣糖原通過冷凍干燥或者噴霧干燥的方法得到最終產(chǎn)物，硫酸化扇貝、牡蠣糖原。本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)1、本發(fā)明以扇貝、牡蠣為材料制取硫酸化糖原。其中，扇貝、牡蠣地域分布范圍廣泛，品種多樣，廉價易得，且扇貝糖原含量占扇貝干基的20%以上，牡蠣糖原含量占牡蠣干基的30%以上，相較于其他硫酸取代多糖，以扇貝、牡蠣為材料的硫酸化多糖可以有效的降低成本。2、扇貝、牡蠣糖原成分清晰，主要是以α- (1-4)葡萄糖糖苷鍵為主體的多聚糖。其成分的單一性有利于生產(chǎn)過程中的品質(zhì)控制，便于檢測生產(chǎn)。保障其活性的穩(wěn)定性。3、牡蠣糖原經(jīng)過修飾后硫酸基會定點(diǎn)修飾在糖殘基C-6位，是最有利其活性發(fā)揮的位點(diǎn)。4、扇貝糖原是從扇貝貝柱中提取，因此無毒無害，免除了從扇貝內(nèi)臟提取中存在貝毒的可能性。5、經(jīng)過硫酸基取代的扇貝糖原其活性明顯，且成本要低得多。是一種非常優(yōu)秀的提高免疫力，抗炎、抗凝血的保健藥物。
6、經(jīng)過硫酸基取代的牡蠣糖原其活性明顯，在體外小鼠淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)其可以提高免疫細(xì)胞增殖70%以上，效果非常明顯，相比較于其他活性多糖，硫酸化的牡蠣糖原活性高，且成本要低得多。是一種非常優(yōu)秀的提高免疫力，抗腫瘤、抗凝血的保健藥物。7、采用膜超濾等技術(shù)，有效的去除修飾過程中有機(jī)試劑的殘留，達(dá)到產(chǎn)品純凈、無試劑殘留的目的。本發(fā)明能夠有效克服現(xiàn)有技術(shù)產(chǎn)品的缺點(diǎn)，得率可以達(dá)到20%左右，且制備的產(chǎn)物具備非常顯著的提高免疫力、抗病毒、抗凝血的能力。
具體實(shí)施例方式實(shí)例一扇貝去殼，留用肉質(zhì)部分，清洗干凈以凍干機(jī)冷凍干燥，粉碎成粉。取用扇貝干粉加入水至干粉的質(zhì)量分?jǐn)?shù)占0.1%，加入商品胃蛋白酶粉末，加入量為底物質(zhì)量的0.1%。以IM鹽酸調(diào)節(jié)溶液至pHl，20°C水浴，酶解0.5小時。酶解完成后溶液再以6M氫氧化鈉調(diào)至溶液PH7，加熱到80°C滅酶5分鐘(其中，調(diào)節(jié)pH值與滅酶步驟可互換)。冷卻至室溫。離心，棄沉淀，上清液加入乙醇使乙醇終濃度達(dá)到溶液體積比例為50%。0.5小時后傾去上清液，收集沉淀，風(fēng)干后即為扇貝糖原。硫酸化試劑制備方法:吡啶與三氧化硫-吡啶試劑互溶，按照體積與質(zhì)量比5ml:1g的比例進(jìn)行配比。將硫酸化試 劑加入扇貝糖原溶液(以卩比唳作為溶劑配制成扇貝糖原濃度IOmg/ml)，硫酸化試劑與糖原溶液比例為體積比1:5 ;在攪拌的情況下沸水浴反應(yīng)2小時；反應(yīng)完畢后以冰鹽浴將反應(yīng)液溫度降低到10°C，之后以堿(IMNaOH)調(diào)節(jié)反應(yīng)液到pH7 ;反應(yīng)產(chǎn)物溶液用透過孔徑為IOkDa工業(yè)陶瓷膜作為超濾工具，自來水為超濾液超濾4小時；孔徑的陶瓷膜截留產(chǎn)物溶液為硫酸化扇貝糖原溶液，再經(jīng)冷凍干燥的方法得到硫酸化扇貝糖原粉。實(shí)例二扇貝去殼，留用肉質(zhì)部分，清洗干凈以凍干機(jī)冷凍干燥，粉碎成粉。取用扇貝干粉加入水至干粉的質(zhì)量分?jǐn)?shù)占10%，再加入商品木瓜蛋白酶粉末，加入量為底物質(zhì)量的0.5%。以IM氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液至pH8，50°C水浴，酶解I小時。酶解后加熱到90°C滅酶10分鐘，溶液以6M硫酸調(diào)至溶液pH7，冷卻，離心，棄沉淀。上清液加入乙醇使乙醇終濃度達(dá)到溶液體積比例為90%。I小時后傾去上清液，收集沉淀，風(fēng)干后即為扇貝糖原。硫酸化試劑制備方法:二甲基甲酰與三氧化硫-吡啶試劑互溶，按照體積與質(zhì)量比5ml:1g的比例進(jìn)行配比。將硫酸化試劑加入扇貝糖原溶液(以吡啶作為溶劑配制成濃度500mg/ml)，硫酸化試劑與糖原溶液比例為體積比1:2 ;在攪拌的情況下沸水浴反應(yīng)0.5小時；反應(yīng)完畢后以冰鹽浴將反應(yīng)液溫度降低到0°C，之后以堿(6M NaOH)調(diào)節(jié)反應(yīng)液到pH7 ;反應(yīng)液用IOKDa半透膜作為超濾工具，自來水超濾72小時；產(chǎn)物溶液直接以溶液的狀態(tài)作為制品使用。實(shí)例三扇貝去殼，留用肉質(zhì)部分，清洗干凈以相同體積加入水，打漿機(jī)打漿成糊狀，得初漿液。取用扇貝初漿液加入水至干物質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)占0.5%，再加入商品胰蛋白酶粉末，加入量為底物質(zhì)量的1.5%。以4M氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液至pH值9，30°C水浴，酶解2小時。酶解后溶液以6M硫酸調(diào)至溶液pH7，再加熱到95°C滅酶15分鐘。冷卻，離心，棄沉淀。上清液加入乙醇使乙醇終濃度達(dá)到溶液體積比例為60%。2小時后傾去上清液，收集沉淀，風(fēng)干后即為扇貝糖原。低溫下((TC)按照氯磺酸:吡啶(體積比為1:2)配比成溶劑，將氯磺酸滴加到吡啶中I小時內(nèi)滴加完畢，制得硫酸化試劑。將硫酸化試劑加入扇貝糖原溶液(以吡啶作為溶劑配制成濃度50mg/ml)，硫酸化試劑與糖原溶液比例為體積比1:1 ;在攪拌的情況下沸水浴反應(yīng)I小時；反應(yīng)完畢后以冰鹽浴將反應(yīng)液溫度降低到4°C，之后以堿(2M NaOH)調(diào)節(jié)反應(yīng)液到pH7 ;反應(yīng)液用0.3kDa透過孔徑的透析袋進(jìn)行透析，自來水透析8小時；產(chǎn)物溶液為硫酸化糖原溶液，再經(jīng)過冷凍干燥得到硫酸化扇貝糖原粉。實(shí)例四扇貝去殼，留用肉質(zhì)部分，清洗干凈以相同體積加入水，打漿機(jī)打漿成糊狀，得漿液。取用扇貝漿加入水至干物質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)占0.8%，再加入商品堿性蛋白酶粉末，加入量為底物質(zhì)量的2%。以IM氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)溶液至pHll，40°C水浴，酶解3小時。酶解后溶液以6M鹽酸調(diào)至溶液pH7，再加熱到100°C滅酶12分鐘。冷卻，以濾布過濾，棄沉淀。上清液加入乙醇使乙醇終濃度達(dá)到溶液體積比例為70%。4小時后傾去上清液，收集沉淀，風(fēng)干后即為扇貝糖原。低溫下(10°C)按照氯磺酸:吡啶(體積比為5:1)將兩者配比成溶劑，將氯磺酸滴加到吡啶中2小時內(nèi)滴加完畢。作為硫酸化試劑。

將硫酸化試劑加入扇貝糖原溶液(以二甲基甲酰胺作為溶劑配制成濃度濃度10mg/ml)，硫酸化試劑與糖原溶液比例為體積比1:5 ;在攪拌的情況下沸水浴反應(yīng)1.5小時；反應(yīng)完畢后以冰鹽浴將反應(yīng)液溫度降低到2°C，之后以堿(6M NaOH)調(diào)節(jié)反應(yīng)液到pH8 ；反應(yīng)液用透過孔徑為7kDa半透膜進(jìn)行超濾，自來水超濾6小時；產(chǎn)物溶液經(jīng)過冷凍干燥得到硫酸化扇貝糖原粉。實(shí)例五扇貝去殼，留用肉質(zhì)部分，清洗干凈以相同體積加入水，打漿機(jī)打漿成糊狀，得漿液。取用扇貝漿加入水至干物質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)占1%，將扇貝漿液溶液放置于沸水浴中進(jìn)行沸水蒸煮5h。冷卻，離心，棄沉淀，上清液加入乙醇使乙醇終濃度達(dá)到溶液體積比例為80%。6小時后傾去上清液，收集沉淀，風(fēng)干后即為扇貝糖原。低溫下(4°C)按照氯磺酸:吡啶(體積比為1:1)配比成溶劑，將氯磺酸滴加到吡啶中1.5小時內(nèi)滴加完畢。作為硫酸化試劑。將硫酸化試劑加入扇貝糖原溶液(以二甲基甲酰胺作為溶劑配制成濃度濃度500mg/ml),硫酸化試劑與糖原溶液比例為體積比5:1 ;在攪拌的情況下沸水浴反應(yīng)I小時；反應(yīng)完畢后以冰鹽浴將反應(yīng)液溫度降低到TC，之后以堿(6M KOH)調(diào)節(jié)反應(yīng)液到pH8 ;反應(yīng)液用透過孔徑為7kDa工業(yè)陶瓷膜進(jìn)行超濾，自來水超濾48小時；產(chǎn)物溶液直接以溶液的狀態(tài)作為制品使用。實(shí)例六扇貝去殼，留用肉質(zhì)部分，清洗干凈以凍干機(jī)冷凍干燥，粉碎成粉。取用扇貝粉加入水至干物質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)占2%，再加入商品酸性蛋白酶粉末，加入量為底物質(zhì)量的3%。以4M鹽酸調(diào)節(jié)溶液pH值至1，45°C水浴，酶解4小時。酶解后溶液以8M氫氧化鉀調(diào)至溶液PH7，加熱到85°C滅酶30分鐘。冷卻，離心，棄沉淀。上清液加入乙醇使乙醇終濃度達(dá)到溶液體積比例為85%。8小時后傾去上清液，收集沉淀，風(fēng)干后即為扇貝糖原。硫酸化試劑制備方法:吡啶與三氧化硫-吡啶試劑互溶，按照兩者體積與質(zhì)量比50ml:1g的比例進(jìn)行配比。將硫酸化試劑加入扇貝糖原溶液(以吡啶為溶劑配制成濃度200mg/ml)，硫酸化試劑與糖原溶液比例為體積比2:1 ;在攪拌的情況下沸水浴反應(yīng)I小時；反應(yīng)完畢后以冰鹽浴將反應(yīng)液溫度降低到3°C，之后以堿(3M NaOH)調(diào)節(jié)反應(yīng)液到pH7 ;反應(yīng)液用透過孔徑為IOkDa工業(yè)陶瓷膜進(jìn)行超濾，自來水超濾6小時；產(chǎn)物溶液經(jīng)過噴霧干燥的方法得到硫酸化扇貝糖原粉。實(shí)例七扇貝去殼，留用肉質(zhì)部分，清洗干凈以凍干機(jī)冷凍干燥，粉碎成粉。取用扇貝粉加入水至干物質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)占4%，再加入商品鏈酶蛋白酶粉末，加入量為底物質(zhì)量的5%。以2M氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH值至8，35°C水浴，酶解5小時。酶解后溶液以4M鹽酸調(diào)至溶液PH7，加熱到100°C滅酶25分鐘。冷卻，離心，棄沉淀。上清液加入乙醇使乙醇終濃度達(dá)到溶液體積比例為75%。10小時后傾去上清液，收集沉淀，風(fēng)干后即為扇貝糖原。硫酸化試劑制備方法:吡啶與三氧化硫-吡啶試劑互溶，按照兩者體積與質(zhì)量比IOml:1g的比例進(jìn)行配比。將硫酸化試劑加入扇貝糖原溶液(以二甲基甲酰胺為溶劑配制成濃度濃度300mg/ml)，硫酸化試劑與糖原溶液比例為體積比4:1 ;在攪拌的情況下沸水浴反應(yīng)1.5小時；反應(yīng)完畢后以冰鹽浴將反應(yīng)液溫度降低到6°C，之后以堿(4M NaOH)調(diào)節(jié)反應(yīng)液到pH8 ;反應(yīng)液用透過孔徑為3kDa半透膜進(jìn)行超濾，自來水超濾10小時；產(chǎn)物溶液經(jīng)過噴霧干燥的方法得到硫酸化扇貝糖原粉。實(shí)例八扇貝去殼，留用肉質(zhì)部分，清洗干凈以相同體積加入水，打漿機(jī)進(jìn)行打漿處理，得漿液。取用扇貝漿液加入水至干物質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)占6%，再加入商品糜蛋白酶粉末，加入量為底物質(zhì)量的6%。以IM氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液至pH8，48°C水浴，酶解6小時。酶解后溶液以90°C滅酶10分鐘，冷卻，離心，棄沉淀。以IM鹽酸調(diào)節(jié)溶液pH到7。上清液加入乙醇使乙醇終濃度達(dá)到溶液體積比例為65%。12小時后傾去上清液，收集沉淀，風(fēng)干后即為扇貝糖原。低溫下(6°C)按照氯磺酸:吡啶(體積比為2:1)配比成溶劑，將氯磺酸滴加到吡啶中1.5小時內(nèi)滴加完畢。作為硫酸化試劑。將硫酸化試劑加入扇貝糖原溶液(以吡啶為溶劑配制成濃度15mg/ml)，硫酸化試劑與糖原溶液比例為體積比4:1 ;在攪拌的情況下沸水浴反應(yīng)1.5小時；反應(yīng)完畢后以冰鹽浴將反應(yīng)液溫度降低到8°C，之后以堿(4M NaOH)調(diào)節(jié)反應(yīng)液到pH8 ;反應(yīng)液用透過孔徑為3kDa透析袋進(jìn)行透析，自來水透析60小時；透析袋內(nèi)產(chǎn)物溶液經(jīng)過冷凍干燥的方法得到硫酸化扇貝糖原粉。
實(shí)例九牡蠣去殼，留用肉質(zhì)部分，清洗干凈以凍干機(jī)冷凍干燥，粉碎成粉。取用牡蠣干粉加入水至干物質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)占8%，加入商品胃蛋白酶粉末，加入量為底物質(zhì)量的10%。以6M鹽酸調(diào)節(jié)溶液至PH3，32°C酶解10小時。酶解后溶液以IM氫氧化鈉調(diào)溶液至pH7，再將溶液加熱到100°C，滅酶10分鐘。冷卻，離心，棄沉淀。上清液加入乙醇使乙醇終濃度達(dá)到溶液體積比例為65%。14小時后傾去上清液，收集沉淀,風(fēng)干后即為牡蠣糖原。硫酸化試劑制備方法:吡啶與三氧化硫-吡啶試劑互溶，按照兩者體積與質(zhì)量比20ml:1g的比例進(jìn)行配比。將硫酸化試劑加入牡蠣糖原溶液(以吡啶作為溶劑配制成濃度400mg/ml)，硫酸化試劑與糖原溶液比例為體積比2:3 ;在攪拌的情況下沸水浴反應(yīng)0.5小時；反應(yīng)完畢后以冰鹽浴將反應(yīng)液溫度降低到0°C，之后以堿(1M NaOH)調(diào)節(jié)反應(yīng)液到pH7 ;反應(yīng)液用透過孔徑為IOkDa工業(yè)陶瓷膜作為超濾工具，自來水超濾12小時；產(chǎn)物溶液經(jīng)過冷凍干燥的方法得到硫酸化牡蠣糖原粉。實(shí)例十牡蠣去殼，留用肉質(zhì)部分，清洗干凈以凍干機(jī)冷凍干燥，粉碎成粉。取用牡蠣干粉加入水至干物質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)占0.4%，再加入商品木瓜蛋白酶粉末，加入量為底物質(zhì)量的7%。以IM鹽酸溶液調(diào)節(jié)溶液至pH6，27°C水浴，酶解7小時。酶解后溶液以IM氫氧化鈉調(diào)溶液至PH7，溶液再以100°C滅酶10分鐘，冷卻，離心，棄沉淀。上清液加入乙醇使乙醇終濃度達(dá)到溶液體積比例為55%。16小時后傾去上清液，收集沉淀,風(fēng)干后即為牡蠣糖原。硫酸化試劑制備方法:二甲基甲酰與三氧化硫-吡啶試劑互溶，按照兩者體積與質(zhì)量比50ml:1g的比例進(jìn)行配比。

將硫酸化試劑加入牡蠣糖原溶液(以吡啶作為溶劑配制成濃度300mg/ml)，硫酸化試劑與糖原溶液比例為體積比3:2 ;在攪拌的情況下沸水浴反應(yīng)2小時；反應(yīng)完畢后以冰鹽浴將反應(yīng)液溫度降低到10°C，之后以堿(6M NaOH)調(diào)節(jié)反應(yīng)液到pH7 ;反應(yīng)液用透過孔徑為5kDa半透膜作為超濾工具，自來水超濾72小時；產(chǎn)物溶液經(jīng)過噴霧干燥的方法得到硫酸化牡蠣糖原粉。實(shí)例^^一牡蠣去殼，留用肉質(zhì)部分，清洗干凈以相同體積加入水,打漿機(jī)打漿成糊狀，得漿液。取用牡蠣漿加入水至干物質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)占0.7%，再加入商品胰蛋白酶粉末，加入量為底物質(zhì)量的8%。以IM氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)溶液pH值至7.5，36°C水浴，酶解8小時。酶解后溶液以90°C滅酶30分鐘。冷卻，再以6M硫酸調(diào)至溶液pH7，離心，棄沉淀。上清液加入乙醇使乙醇終濃度達(dá)到溶液體積比例為56%。16小時后傾去上清液，收集沉淀，風(fēng)干后即為牡蠣糖原。低溫下(8°C)按照氯磺酸:吡啶(體積比為3:1)配比成溶劑，將氯磺酸滴加到吡啶中0.5小時內(nèi)滴加完畢。作為硫酸化試劑。將硫酸化試劑加入牡蠣糖原溶液(以吡啶作為溶劑配制成濃度25mg/ml)，硫酸化試劑與糖原溶液比例為體積比1:3 ;在攪拌的情況下沸水浴反應(yīng)I小時；反應(yīng)完畢后以冰鹽浴將反應(yīng)液溫度降低到4°C，之后以堿(2M NaOH)調(diào)節(jié)反應(yīng)液到pH7 ;反應(yīng)液用透過孔徑為IOkDa透析袋進(jìn)行透析，自來水透析20小時；透析袋內(nèi)產(chǎn)物溶液經(jīng)過冷凍干燥的方法得到硫酸化牡蠣糖原粉。實(shí)例十二牡蠣去殼，留用肉質(zhì)部分，清洗干凈以相同體積加入水,打漿機(jī)打漿成糊狀，得漿液。取用牡蠣漿加入水至干物質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)占5%，再加入商品堿性蛋白酶粉末，加入量為底物質(zhì)量的9%。以4M氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液至pH值10，48°C水浴，酶解9小時。酶解后溶液以100°C滅酶10分鐘。冷卻，以6M鹽酸調(diào)至溶液pH7，以濾布過濾，棄沉淀。上清液加入乙醇使乙醇終濃度達(dá)到溶液體積比例為50%。18小時后傾去上清液，收集沉淀，風(fēng)干后即為牡蠣糖原。低溫下(2°C)按照氯磺酸:吡啶(體積比為4:1)配比成溶劑，將氯磺酸滴加到吡啶中0.5小時內(nèi)滴加完畢。作為硫酸化試劑。將硫酸化試劑 加入牡蠣糖原溶液(以二甲基甲酰胺作為溶劑配制成濃度濃度80mg/ml),硫酸化試劑與糖原溶液比例為體積比3:1 ;在攪拌的情況下沸水浴反應(yīng)I小時；反應(yīng)完畢后以冰鹽浴將反應(yīng)液溫度降低到5°C，之后以堿(5M NaOH)調(diào)節(jié)反應(yīng)液到pH8 ;反應(yīng)液用透過孔徑為5kDa半透膜進(jìn)行超濾，自來水超濾24小時；產(chǎn)物溶液經(jīng)過冷凍干燥的方法得到硫酸化牡蠣糖原粉。實(shí)例十三牡蠣去殼，留用肉質(zhì)部分，清洗干凈以相同體積加入水，打漿機(jī)打漿成糊狀,得漿液。取用牡蠣漿加入水至干物質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)占9%，再加入商品堿性蛋白酶粉末，加入量為底物質(zhì)量的9%。以4M氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液至pH值10，48°C水浴，酶解9小時。酶解后溶液以100°C滅酶10分鐘。冷卻，再以6M鹽酸調(diào)至溶液pH7，以濾布過濾，棄沉淀。上清液加入乙醇使乙醇終濃度達(dá)到溶液體積比例為76%。18小時后傾去上清液，收集沉淀，風(fēng)干后即為牡蠣糖原。低溫下(3°C)按照氯磺酸:吡啶(體積比為4:1)配比成溶劑，將氯磺酸滴加到吡啶中I小時內(nèi)滴加完畢。作為硫酸化試劑。將硫酸化試劑加入牡蠣糖原溶液(以二甲基甲酰胺作為溶劑配制成濃度濃度200mg/ml)，硫酸化試劑與糖原溶液比例為體積比1:3 ;在攪拌的情況下沸水浴反應(yīng)1.5小時；反應(yīng)完畢后以冰鹽浴將反應(yīng)液溫度降低到7°C，之后以堿(1M Κ0Η)調(diào)節(jié)反應(yīng)液到pH8 ；反應(yīng)液用透過孔徑為IOkDa工業(yè)陶瓷膜進(jìn)行超濾，自來水超濾48小時；產(chǎn)物溶液經(jīng)過冷凍干燥的方法得到硫酸化牡蠣糖原粉。實(shí)例十四牡蠣去殼，留用肉質(zhì)部分，清洗干凈以凍干機(jī)冷凍干燥，粉碎成粉。取用牡蠣粉加入水至干物質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)占2.5%，再加入商品酸性蛋白酶粉末，加入量為底物質(zhì)量的0.5%。以4M鹽酸調(diào)節(jié)溶液pH值至1，28°C水浴，酶解2.5小時。酶解后溶液以85°C滅酶10分鐘。冷卻，以3M氫氧化鉀調(diào)至溶液pH7，離心，棄沉淀。上清液加入乙醇使乙醇終濃度達(dá)到溶液體積比例為86%。20小時后傾去上清液，收集沉淀，風(fēng)干后即為牡蠣糖原。硫酸化試劑制備方法:二甲基甲酰與三氧化硫-吡啶試劑互溶，按照兩者體積與質(zhì)量比40ml:1g的比例進(jìn)行配比。將硫酸化試劑加入牡蠣糖原溶液(以吡啶為溶劑配制成濃度90mg/ml)，硫酸化試劑與糖原溶液比例為體積比4:1 ;在攪拌的情況下沸水浴反應(yīng)I小時；反應(yīng)完畢后以冰鹽浴將反應(yīng)液溫度降低到3°C，之后以堿(3M NaOH)調(diào)節(jié)反應(yīng)液到pH7 ;反應(yīng)液用透過孔徑為SkDa工業(yè)陶瓷膜進(jìn)行超濾，自來水超濾40小時；產(chǎn)物溶液經(jīng)過冷凍干燥的方法得到硫酸化牡蠣糖原粉。
實(shí)例十五牡蠣去殼，留用肉質(zhì)部分，清洗干凈以凍干機(jī)冷凍干燥，粉碎成粉。取用牡蠣粉加入水至干物質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)占5.6%，再加入商品鏈酶蛋白酶粉末，加入量為底物質(zhì)量的
0.7%。以2M鹽酸調(diào)節(jié)溶液pH值至7，33°C水浴，酶解3.5小時。酶解后溶液以100°C滅酶10分鐘。冷卻，離心，棄沉淀。上清液加入乙醇使乙醇終濃度達(dá)到溶液體積比例為56%。22小時后傾去上清液，收集沉淀，風(fēng)干后即為牡蠣糖原。硫酸化試劑制備方法:二甲基甲酰與三氧化硫-吡啶試劑互溶，按照兩者體積與質(zhì)量比50ml:1g的比例進(jìn)行配比。將硫酸化試劑加入牡蠣糖原溶液(以二甲基甲酰胺為溶劑配制成濃度濃度70mg/ml)，硫酸化試劑與糖原溶液比例為體積比1:1 ;在攪拌的情況下沸水浴反應(yīng)1.5小時；反應(yīng)完畢后以冰鹽浴將反應(yīng)液溫度降低到6°C，之后以堿(6M NaOH)調(diào)節(jié)反應(yīng)液到pH8 ;反應(yīng)液用透過孔徑為SkDa半透膜進(jìn)行超濾，自來水超濾70小時；產(chǎn)物溶液經(jīng)過噴霧干燥的方法得到硫酸化牡蠣糖原粉。實(shí)例十六牡蠣去殼，留用肉質(zhì)部分，清洗干凈加入相同體積水，打漿機(jī)進(jìn)行打漿處理，得漿液。取用牡蠣漿液加入水至干物質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)占0.3%，再加入商品糜蛋白酶粉末，加入量為底物質(zhì)量的4.5%。以2M氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)溶液至pH8，29°C水浴，酶解4.5小時。酶解后溶液以2M鹽酸調(diào)節(jié)溶液pH值至7，溶液再加熱到90°C滅酶10分鐘，冷卻，離心，棄沉淀。上清液加入乙醇使乙醇終濃度達(dá)到溶液體積比例為83%。23小時后傾去上清液，收集沉淀，風(fēng)干后即為牡蠣糖原。低溫下(9°C)按照氯磺酸:吡啶(體積比為5:1)配比成溶劑，將氯磺酸滴加到吡啶中1.5小時內(nèi)滴加完畢。作為硫酸化試劑。將硫酸化試劑加入牡蠣糖原溶液(以吡啶為溶劑配制成濃度200mg/ml)，硫酸化試劑與糖原溶液比例為體積比1:5 ;在攪拌的情況下沸水浴反應(yīng)1.5小時；反應(yīng)完畢后以冰鹽浴將反應(yīng)液溫度降低到6°C，之后以堿(4M NaOH)調(diào)節(jié)反應(yīng)液到pH8 ;反應(yīng)液用透過孔徑為7kDa透析袋進(jìn)行透析，自來水透析50小時；透析袋內(nèi)產(chǎn)物溶液經(jīng)過冷凍干燥的方法得到硫酸化牡蠣糖原粉。上述實(shí)施例方法的干品得率均可達(dá)到20%左右，大大提升了產(chǎn)品得率，具有產(chǎn)出高的特點(diǎn)。綜上，本發(fā)明基于牡蠣、扇貝制備硫酸化糖原的方法，綜合步驟如下:(一)扇貝、牡蠣的前處理扇貝、牡蠣去殼，留用肉質(zhì)部分，清洗干凈以凍干機(jī)冷凍干燥，凍干的時間為12-60h，粉碎成粉；或者去殼扇貝、牡蠣打漿成糊狀留用。(二)扇貝、牡蠣糖原的制備取用扇貝、牡蠣干粉加入水(或者取用扇貝、牡蠣打漿后漿液)加入水至溶質(zhì)達(dá)到
0.1% 10% ;加入酶制 劑胃蛋白酶(木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、堿性蛋白酶、酸性蛋白酶、糜蛋白酶、鏈酶蛋白酶等商品蛋白酶皆可)，加入量為底物質(zhì)量的0.1% 10%。以IM IOM的酸調(diào)節(jié)至酶的最適pH值(堿性的酶可用IM IOM的堿調(diào)節(jié)),按酶的最適溫度酶解0.5 10小時。酶解后80 100°C滅酶10分鐘。冷卻，以酸或堿調(diào)至溶液pH中性。離心或者過濾去沉淀。留用上清液，上清液加入乙醇進(jìn)行醇沉沉淀使乙醇體積終濃度達(dá)到50% 90%。I 24小時后傾去上清液，收集沉淀，風(fēng)干后即為扇貝、牡蠣糖原。也可以采用扇貝、牡蠣干粉或者漿液，加入水至溶質(zhì)達(dá)到0.1% 10%后沸水提取1-10個小時，過濾或者離心后，上清液進(jìn)行乙醇沉淀。沉淀即為扇貝、牡蠣糖原。(三)硫酸化試劑的制備方法1、采用溶劑吡啶或者二甲基甲酰胺以5ml/g 50ml/g的比例與三氧化硫-吡啶試劑互溶；方法2、低溫下(0V 10°C)按照0.5:1 5:1比例將氯磺酸滴加到吡啶中0.5 2小時內(nèi)滴加完畢。(四)扇貝、牡蠣糖原的硫酸化修飾方法1、按上述方法I配制的試劑加入扇貝、牡蠣糖原溶液(以吡啶或二甲基甲酰胺作為溶劑配制成濃度10ml/g),其比例為10ml/g 50ml/g ;在攪拌的情況下沸水浴反應(yīng)
0.5 2小時；反應(yīng)完畢后以冰鹽浴將反應(yīng)液溫度降低到0°C 10°C，之后以堿(1-6M NaOH或KOH)調(diào)節(jié)到pH7 8 ;用半透膜或者工業(yè)陶瓷膜作為超濾工具，自來水超濾12 72小時(透析膜透析也可)；產(chǎn)物溶液經(jīng)過冷凍干燥或噴霧干燥的方法得到硫酸化扇貝、牡蠣糖原粉。方法2、按上述方法2配制的試劑加入扇貝、牡蠣糖原溶液(以吡啶或二甲基甲酰胺作為溶劑配制成濃度10ml/g),其比例為10ml/g 50ml/g ;在攪拌的情況下沸水浴反應(yīng)
0.5 2小時；反應(yīng)完畢后以冰鹽浴將反應(yīng)液溫度降低到0°C 10°C，之后以堿(1-6M NaOH或KOH)調(diào)節(jié)到pH7 8 ;用半透膜或者工業(yè)陶瓷膜作為超濾工具，自來水超濾12 72小時(透析膜透析也可)；產(chǎn)物溶液 經(jīng)過冷凍干燥或噴霧干燥的方法得到硫酸化扇貝、牡蠣糖原粉。以上所述，僅為本發(fā)明較佳的具體實(shí)施方式
，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此，任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明披露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其發(fā)明構(gòu)思加以等同替換或改變，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種基于牡蠣、扇貝制備硫酸化糖原的方法，其特征在于，包括如下步驟: 51、取牡蠣或扇貝冷凍干燥至水分質(zhì)量含量O 10%，攪拌粉碎成粉末，以粉末加水制備漿液；或者取鮮牡蠣或扇貝直接加水，勻漿獲得漿液； 所述漿液中固態(tài)物質(zhì)量應(yīng)占總質(zhì)量的0.1% 5% ； 52、利用所述漿液獲得牡蠣糖原或扇貝糖原； 53、制備硫酸化試劑； 54、利用所述硫酸化試劑對所述扇貝或牡蠣糖原進(jìn)行硫酸化修飾。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于牡蠣、扇貝制備硫酸化糖原的方法，其特征在于，所述步驟S2包括如下工序: 521、所述漿液中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1% 10%的胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、堿性蛋白酶、酸性蛋白酶、糜蛋白酶、鏈酶蛋白酶中的一種；調(diào)節(jié)PH值至所用酶的適宜環(huán)境，20 50°C酶解0.5 10小時； 522、80 100。。滅酶 5-30 分鐘； 523、冷卻后調(diào)pH值至中性， 524、離心或者過濾去沉淀，留用上清液； 525、所述上清液加入乙醇使乙醇終濃度達(dá)到體積比50% 90%進(jìn)行醇沉沉淀；0.5 24小時后傾去上清液，收集沉淀，即為相應(yīng)的扇貝糖原或牡蠣糖原。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述基于牡蠣、扇貝制備硫酸化糖原的方法，其特征在于，步驟S21中適宜酶解的環(huán)境分別為:所述胃蛋白酶PHl 3、木瓜蛋白酶pH5 9、胰蛋白酶pH7 9、堿性蛋白酶pH8 11或、酸性蛋白酶pHl 3、糜蛋白酶pH8 9、鏈酶蛋白酶pH7 8。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于牡蠣、扇貝制備硫酸化糖原的方法，其特征在于，所述步驟S2包括如下工序: 所述漿液加熱煮沸ι- ο小時，冷卻后過濾或者離心，棄去沉淀；上清液加入乙醇使乙醇終濃度達(dá)到體積比50% 90%，棄去乙醇沉淀后的上清液，醇沉沉淀部分即為扇貝糖原或牡蠣糖原。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一所述基于牡蠣、扇貝制備硫酸化糖原的方法，其特征在于， 所述步驟S3的具體工序?yàn)?按照溶劑體積與溶質(zhì)質(zhì)量比5 50ml:1g的比例將溶劑吡啶或者二甲基甲酰胺溶劑與溶質(zhì)三氧化硫-吡啶互溶，制備所述硫酸化試劑； 或者，O 10°C下按照0.5 5:1比例將氯磺酸滴加到吡啶中，以0.5 2小時內(nèi)均勻滴加完畢，制得所述硫酸化試劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述基于 牡蠣、扇貝制備硫酸化糖原的方法，其特征在于，所述步驟S4包括如下工序: S41、以吡啶或二甲基甲酰胺作為溶劑將所述扇貝糖原或牡蠣糖原配制成濃度10 500mg/ml的糖原溶液； S42、所述硫酸化試劑加入所述糖原溶液，兩種溶液的體積比例為1:5 5:1; S43、在攪拌的情況下沸水浴反應(yīng)0.5 2小時； S44、以冰鹽浴將反應(yīng)液溫度降低到O 10°C； S45、用1-6M的NaOH或KOH調(diào)節(jié)到pH7 8; S46、用3 IOkDa孔徑的半透膜或者工業(yè)陶瓷膜作為超濾工具，自來水超濾4 72小時，產(chǎn)物溶液為硫酸化糖原溶液； 或者選用透析方法，以分子大小為3kDa IOkDa孔徑的透析袋扎緊，自來水透析4 72小時，袋內(nèi)溶液為硫酸化糖原溶液。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述基 于牡蠣、扇貝制備硫酸化糖原的方法，所述硫酸化糖原溶液經(jīng)過冷凍干燥或噴霧干燥的方法得到硫酸化扇貝或硫酸化牡蠣糖原粉。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種基于牡蠣、扇貝制備硫酸化糖原的方法，包括如下步驟1.取牡蠣或扇貝冷凍干燥至水分質(zhì)量含量0～10%，攪拌粉碎成粉末，以粉末加水制備漿液；或者取鮮牡蠣或扇貝直接加水，勻漿獲得漿液；所述漿液中固態(tài)物質(zhì)量應(yīng)占總質(zhì)量的0.1%～5%；2.利用所述漿液獲得牡蠣糖原或扇貝糖原；3.制備硫酸化試劑；4.利用所述硫酸化試劑對所述扇貝或牡蠣糖原進(jìn)行硫酸化修飾。本發(fā)明方法具有得率高、成本低、產(chǎn)品活性穩(wěn)定性突出的特點(diǎn)，得率可以達(dá)到20%左右，且制備的產(chǎn)物具備非常顯著的提高免疫力、抗病毒、抗凝血的能力。
文檔編號A61P29/00GK103172760SQ20131009991
公開日2013年6月26日 申請日期2013年3月26日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月26日
發(fā)明者朱蓓薇, 楊靜峰, 趙君, 曹倩倩, 朱策, 姜鵬飛 申請人:大連工業(yè)大學(xué)