專利名稱：：一種中藥組合物、其制備方法及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種中藥組合物、其制備方法及其應(yīng)用。該中藥組合物可用于治療流感和上呼吸道感染等疾病。
背景技術(shù)：
：隨著社會的發(fā)展和疾病譜的擴大，傳統(tǒng)中醫(yī)的辯證論治正面臨著許多新的課題與挑戰(zhàn)，如"感冒"這一普通病證，又因體質(zhì)強弱、天時氣候、生活環(huán)境、邪毒輕重、受病深淺等不同，所見病侯亦異。中醫(yī)傳統(tǒng)的辯證分型雖將感冒分為風(fēng)熱、風(fēng)寒兩大類，也有"表實、表虛、表里俱實"之說，但相對應(yīng)的方劑單一，且又多為湯劑形式，服用不便。造成理論與臨床實際需要的脫節(jié)?？v觀目前已上市的治療"感冒"的常用中成藥如維c強力銀翹片、雙黃連口服液等，均以清熱解毒藥為主組方，功能主治重在清熱解表，適合于溫?zé)嶂翱陀谛l(wèi)表的單純表證，專為上感、流感、急性扁桃體炎、腮腺炎、乙腦等初期階段而設(shè)，治以辛涼解表、清熱解毒，使病邪從表而解。根椐相關(guān)資料報告及臨床觀察總結(jié)后發(fā)現(xiàn)，近年來由于生活水平的提高，導(dǎo)致飲食結(jié)構(gòu)有明顯的改變，中餐西化，脂多味重等高熱量的飲食更易導(dǎo)致人體胃腸道產(chǎn)生積滯，如復(fù)感風(fēng)熱之邪或感寒化熱后，使感冒的證型多表現(xiàn)為外感風(fēng)熱、內(nèi)有積滯的表里俱實之證。傳統(tǒng)方劑"防風(fēng)通圣散"雖專為表里俱實之證而設(shè)，但其重點在于疏風(fēng)解表，清熱之功又顯不足，本發(fā)明的中藥組合物處方針對感冒這一疾病本身復(fù)雜多元的特點，采取中蒙醫(yī)藥理論優(yōu)勢互補，取蒙醫(yī)藥之長，融中醫(yī)藥之論，組方配伍重在清熱解表、通里泄熱，專為外感風(fēng)熱、內(nèi)有積滯的表里俱實之證而設(shè)，對上感、流感、腮腺炎、急性扁桃體炎等兼有內(nèi)熱積滯者療效顯著，且劑型科學(xué)、便于儲攜、更適于現(xiàn)代快節(jié)奏的生活方式。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供一種中藥組合物，其由下述原料藥材制成葛根80-130重量份板蘭根70-110重量份山豆根或北豆根60-120重量份蘆根70-115重量份白茅根65-100重量份霍香70-120重量份紅花70-110重量份大黃10-50重量份。本發(fā)明的中藥組合物優(yōu)選由下述原料藥材制得:葛根85-120重量份蘆根75-110重量份紅花75-105重量份板蘭根80-IOO重量份山豆根或北豆根70-115重量份白茅根70-95重量份大黃15-45重量份。藿香75-115重量份所述原料藥材更優(yōu)選為葛根85-100重量份蘆根80-105重量份紅花80-100重量份板蘭根85-95重量份白茅根75-95重量份大黃20-40重量份。山豆根或北豆根85-105重量份藿香80-110重量份進一步優(yōu)選為葛根85-95重量份蘆根85-100重量份紅花85-95重量份板蘭根90-95重量份白茅根80-95重量份大黃25-35重量份。山豆根或北豆根90-100重量份藿香85-105重量份最優(yōu)選為葛根90重量份戸根90重量份紅花90重量份板蘭根90重量份白茅根90重量份大黃30重量份。山豆根或北豆根90重量份藿香90重量份上述原料藥材中藿香可用廣藿香代替。本發(fā)明的另一個目的在于提供本發(fā)明所述的中藥組合物的制備方法。本發(fā)明所述中藥組合物的制備方法可以是方法一取藿秀加水4-12(w/v)倍量浸泡0.5-3小時，蒸餾提取3-6小時，將提取得到的揮發(fā)油備用；蒸餾后的水溶液及藥渣分別另器收集；葛根用30-95%的乙醇回流提取1-3次，每次加乙醇4-12倍量(w/v)回流0.5-5小時，藥液藥渣備用；大黃用4-12(w/v)倍量50-80X乙醇回流提取l-2次，每次0.5-l小時，藥渣藥液備用；將上述蒸餾提取及乙醇提取后備用的藥渣與其余五味藥材合并，加水4-12倍量浸泡0.5-3小時，煎煮l-3次，每次0.5-3小時，合并所有水煎液及蒸餾提取揮發(fā)油后的藿香水溶液，濃縮至相對密度約1.0-1.2，加入乙醇使含醇量達到40-70%，取上g液回收乙醇后備用；合并以上藥液，加水至1000mL攪勻，冷藏12-72小時后過濾，濾液備用。另取適量吐溫-80與揮發(fā)油充分混和均勻后加入加熱至50-75'C左右的藥液中，待充分溶解后，補足水量至1000ml，冷藏，濾過，灌裝，滅菌，制成所需劑型。以上制備方法用于制備液體制劑。方法二取藿香加水4-12(w/v)倍量浸泡0.5-3小時，蒸餾提取3-8小時，將提取得到的揮發(fā)油加入5-25倍e環(huán)糊精制成的水飽和溶液中，30-6(TC下攪拌1-5小時進行包合，得到揮發(fā)油包合物；蒸餾后的水溶液及藥渣分別另器收集；葛根用30_95%的乙醇回流提取1-3次，每次加乙醇4-12倍量(w/v)回流0.5-5小時，藥液藥渣備用；大黃用4-12(w/v)倍量50-80%乙醇回流提取l-2次，每次0.5-l小時，藥渣藥液備用；將上述蒸餾提取及乙醇提取后備用的藥渣與其余五味藥材合并，加水4-12倍量浸泡0.5-3小時，煎煮l-3次，每次0.5-3小時，合并所有水煎液及蒸餾提取后的水溶液，濃縮至相對密度約1.0-1.2，加入乙醇使含醇量達到40-70%，取上清液回收乙醇后備用；合并以上藥液，濃縮，濃縮物中加入上述揮發(fā)油包合物以及任選的適量輔料以制成所需劑型。以上制備方法用于制備固體制劑。本發(fā)明的中藥組合物可為各種劑型，其包括但不限于顆粒劑；膠囊劑，如硬膠囊劑、軟膠囊劑；片劑，如浸膏片、半浸膏片、泡騰片、分散片等；丸劑，如蜜丸、水蜜丸、水丸、糊丸、蠟丸、濃縮丸；煎膏劑；糖漿劑；合劑，如口服液；酒劑；流浸膏劑；浸膏劑；散劑；滴丸；噴霧劑；注射劑，如注射液、注射用無菌粉末、注射用濃溶液等。本發(fā)明的中藥組合物具有清熱解表、通里泄熱的功能，主治由外感風(fēng)熱、內(nèi)有積滯所致的發(fā)熱惡寒、頭部脹痛、鼻塞流涕、咽紅咽痛、口干口渴、腹脹便秘、小便短赤等表里俱實之證，因而在治療流感、上感中有顯著的效果，能夠明顯減輕小鼠耳廓腫脹程度，抑制毛細血管通透性，抑制酵母致大鼠體溫升高；對乙型溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌、肺炎桿菌、白色念株菌和肺炎雙球菌有較強抑制作用，可提高抗感染能力；體內(nèi)抑流感桿菌的作用與氨芐青霉素相似，體內(nèi)抑肺炎克氏菌的作用與慶大霉素相似。在體外能抑制或延緩某些與呼吸道感染有關(guān)病毒的致細胞病變作用，在體內(nèi)能顯著減輕流感病毒所致小鼠的肺炎程度，且能特異性抑制流感病毒在鼠肺內(nèi)的增殖量。具體實施例方式下面結(jié)合制備實施例與藥效試驗對本發(fā)明的中藥組合物作進一步的詳細說明。實施例1:葛根85重量份；板蘭根70重量份；北豆根60重量份；蘆根70重量份；白茅根65重量份；霍香75重量份；紅花70重量份；大黃15重量份。以上八味藥材，粉碎，制成散劑，包裝，即得。實施例2:葛根125重量份板蘭根80重量份北豆根105重量份盧根95重量份白茅根100重量份廣藿香110重量份紅花85重量份大黃20重量份。以上八味藥材，加水煎煮2次，每次加水12倍量煎煮2.5小時，過濾；合并濾液，濃縮至相對密度約1.0-1.2，加乙醇使含醇量達60%;取上清液，回收乙醇，濃縮，制成糖漿劑，包裝，即得。實施例3:葛根100重量份；板蘭根80重量份；北豆根80重量份；蘆根77重量份；白茅根75重量份；廣霍香80重量份；紅花85重量份；大黃15重量份。先取廣藿香加io倍水浸泡2小時，蒸餾3小時提取揮發(fā)油，揮發(fā)油加入7倍e環(huán)糊精包合制成的水飽和溶液，3(TC下攪拌1.5小時包合，經(jīng)冷藏24小時，過濾，6(TC干燥，得包合物。蒸餾后的水溶液及藥渣分別另器收集；葛根用85%的乙醇回流提取3次，每次加乙醇8倍量回流2小時，tfl過，備用。大黃用60%的乙醇回流提取1次，每次加乙醇10倍量回流1小時，濾過，備用。上述藥渣與其余五味藥加水煎煮2次，每次加水8倍量煎煮2小時，趁熱過濾；合并濾液與上述藿香蒸餾后的水溶液，濃縮至相對密度1.15，加乙醇使含醇量達60%;取上清液回收乙醇，濃縮、干燥、粉碎，加入揮發(fā)油e環(huán)糊精包合物，制成丸劑。實施例4:葛根100重量份蘆根90重量份紅花80重量份板蘭根90重量份白茅根75重量份大黃20重量份。北豆根95重量份藿香85重量份取藿香加6倍水浸泡3小時，蒸餾5小時提取揮發(fā)油，揮發(fā)油密閉保存。蒸餾后的水溶液及藥渣分別另器收集；葛根用50%的乙醇回流提取2次，每次加乙醇6倍量(v/w)，每次回流1.5小時，濾過，備用。大黃用80%的乙醇回流提取2次，每次加乙醇6倍量(v/w)，每次回流1小時，濾過，備用。上述藥渣與其余五味藥加水煎煮3次，每次加水6倍量煎煮2小時，趁熱過濾；合并濾液與上述藿香蒸餾后的水溶液，濃縮至相對密度1.20，加乙醇使含醇量達65%;取上清液回收乙醇，濃縮，加入揮發(fā)油，制成噴霧劑。實施例5:葛根85重量份蘆根85重量份紅花95重量份板蘭根95重量份白茅根80重量份大黃30重量份。北豆根85重量份藿香90重量份先取藿香加8倍量水浸泡2小時，蒸餾3小時提取揮發(fā)油，揮發(fā)油、蒸餾后的水溶液及藥渣分別另器收集；葛根用90%的乙醇回流提取2次，每次加乙醇8倍量(v/w)，每次回流2小時，濾過，備用。大黃用70%的乙醇回流提取2次，第一次1小時，第二次0.5小時，合并兩次提取液，減壓回收乙醇，藥液備用。上述藥渣與其余五味藥加水煎煮3次，每次加水6倍量煎煮1小時.趁熱過濾；合并濾液與上述藿香蒸餾后的水溶液，濃縮至相對密度約1.2，加乙醇使含醇量達60%;取上清液，回收乙醇，加入揮發(fā)油，制成注射劑。實施例6葛根90kg蘆根90kg紅花90kg板蘭根90kg白茅根90kg大黃45kg。北豆根90kg廣藿香90kg先取廣藿香加6倍水浸泡3小時，蒸餾6小時提取揮發(fā)油，揮發(fā)油加入15倍e環(huán)糊精包合制成的水飽和溶液，4(TC下攪拌2小時包合，經(jīng)冷藏24小時，過濾，4(TC干燥，得包合物。蒸餾后的水溶液及藥渣分別另器收集；葛根用50%的乙醇回流提取2次，每次加乙醇6倍量(v/w)，每次回流2.5小時，濾過，濾液及藥渣備用。大黃用70%的乙醇回流提取2次，每次加乙醇6倍量(v/w)，每次回流l小時，濾過，濾液及藥渣備用。上述藥渣與其余五味藥加水煎煮2次，每次加水6倍量煎煮2小時，趁熱過濾；合并濾液與上述藿香蒸餾后的水溶液，濃縮至相對密度約1.2，加乙醇使含醇量達65%;取上清液回收乙醇，濃縮，干燥，加入揮發(fā)油e環(huán)糊精包合物，制成軟膠囊劑。實施例7:葛根5.45kg板蘭根5.45kg北豆根5.451kg蘆根5.45kg白茅根5.45kg廣藿香5.45kg紅花5.45kg大黃1.85kg。以上八味，葛被用8倍量90%乙醇，加熱回流兩次，每次2小時，合并兩次提取液，減壓回收乙醇，藥液備用；大黃用8倍量70%乙醇加熱回流兩次，第一次1小時，第二次0.5小時，合并兩次提取液，減壓回收乙醇，藥液備用；廣藿香蒸餾3小時提取揮發(fā)油，分離揮發(fā)油，揮發(fā)油注入采用溶液法制備的e"CD飽和溶液中(油水CD二1:15:8)，攪拌4小時，密閉保存，蒸餾后的水溶液另器收集，藥渣備用；板蘭根、蘆根、白茅根、北豆根、紅花等五味與上述藥渣合并，加水煎煮兩次，第一次加水12倍量，煎煮1小時，第二次加水8倍量，煎煮0.5小時，合并兩次煎液及蒸餾后的廣藿香水溶液，濃縮至l:l(每ml藥液相當(dāng)于lg生藥)，放冷后加入乙醇，使含醇量達到60%，靜置冷藏48小時后過濾，濾液減壓回收乙醇，藥液備用。合并以上藥液，減壓濃縮至相對密度約l.1，加入上述6"CD包合物及成品量三分之一的糊精，噴霧干燥(控制進刁溫度為21(TC，出口溫度為9(TC)成顆粒，包裝，即得。實施例8:葛根90kg板蘭根90kg北豆根90kg蘆根90kg白茅根90kg廣藿香90kg紅花90kg大黃30kg。以上八味，葛，、用8倍量90%乙醇，加熱回流兩次，每次2小時，合并兩次提取液，減壓回收乙醇，藥液備用；大黃用8倍量70%乙醇加熱回流2次，每次1小時，合并兩次提取液，減壓回收乙醇，藥液備用；廣藿香蒸餾3小時提取揮發(fā)油，分離揮發(fā)油，密閉保存，蒸餾后的水溶液另器收集。其余板蘭根等五味，加水煎煮兩次，每次1小時，第一次加水12倍量，第二次加水8倍量，合并兩次煎液及蒸餾后的廣藿香水溶液，濃縮至相對密度約為1.0-1.2，放冷后加入乙醇，使含醇量達到60%，靜置冷藏48小時后過濾，濾液回收乙醇后與上述藥液合并。加水至1000mL攪勻，冷藏(28°C)48小時以上，壓濾(內(nèi)膜為聚砜，孔徑為lum)，濾液備用。取甜菊糖(0.6X)6g制成糖漿，過濾后與上述藥液合并，另取適量吐溫-80(約0.5%)與揮發(fā)油充分混和均勻后加入加熱至70'C左右的藥液中，待充分溶解后，補足水量至1000ml，冷藏，濾過，灌裝，滅菌(流通蒸汽115'C，30分鐘)，制成口服液。實施例9:葛根90kg板蘭根90kg北豆根90kg蘆根90kg白茅根90kg廣藿香90kg紅花90kg大黃30kg。以上八味，葛根用8倍量90%乙醇，加熱回流兩次，每次2小時，合并兩次提取液，減壓回收乙醇，藥液備用；大黃用8倍量70%乙醇加熱回流兩次，第一次1小時，第二次0.5小時，合并兩次提取液，減壓回收乙醇，藥液備用；廣藿香蒸餾3小時提取揮發(fā)油，分離揮發(fā)油，揮發(fā)油注入采用溶液:去制備的e"CD飽和溶液中(油水e—CD=1:15:8)，攪拌4小時，密閉保存，蒸餾后的水溶液另器收集，藥渣備用；板蘭根、蘆根、白茅根、北豆根、紅花等五味與上述藥渣合并，加水煎煮兩次，第一次加水12倍量，煎煮1小時，第二次加水8倍量，煎煮0.5小時，合并兩次煎液及蒸餾后的廣藿香水溶液，濃縮至l:l(每ml藥液相當(dāng)于lg生藥)，放冷后加入乙醇，使含醇量達到60%，靜置冷藏48小時后過濾，濾液減壓回收乙醇，藥液備用。合并以上藥液，減壓濃縮至相對密度約l.l，加入上述P—CD包合物，制成泡騰片，包裝，即得。實施例10:葛根5.45kg板蘭根5.45kg北豆根5.451kg盧根5.45kg白茅根5.45kg廣藿香5.45kg紅花5.45kg大黃1.85kg。以上八味，葛根用8倍量90%乙醇，加熱回流兩次，每次2小時，合并兩次提取液，減壓回收乙醇，藥液備用；大黃用8倍量70%乙醇加熱回流兩次，第一次1小時，第二次0.5小時，合并兩次提取液，減壓回收乙醇，藥液備用；廣藿香蒸餾3小時提取揮發(fā)油，分離揮發(fā)油，揮發(fā)油注入采用溶液法制備的e^CD飽和溶液中(油水e—CD二l:15:8)，攪拌4小時，密閉保存，蒸餾后的水溶液另器收集，.藥渣備用；板蘭根、戸根、白茅根、北豆根、紅花等五味與上述藥渣合并，加水煎煮兩次，第一次加水12倍量，煎煮1小時，第二次加水8倍量，煎煮0.5小時，合并兩次煎液及蒸餾后的廣藿香水溶液，濃縮至l:l(每ml藥液相當(dāng)于lg生藥)，放冷后加入乙醇，使含醇量達到60%，靜置冷藏48小時后過濾，濾液減壓回收乙醇，藥液備用。合并以上藥液，減壓濃縮至相對密度約l.l，加入上述e—CD包合物，制成濃縮丸，包裝，即得。藥效試驗實施例由原料藥按實施例2的配方和制法制成本發(fā)明的中藥組合物，能夠明顯減輕小鼠耳廓腫脹程度，明顯抑制3細血管通透性。明顯抑制酵母致大鼠體溫升高，對三聯(lián)菌苗引起的家兔體溫升高有明顯的抑制作用，作用維持3小時以上。對乙型溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌、肺炎桿菌具有較強的抑制作用，其次為白色念株菌、綠膿桿菌和肺炎雙球菌。一次給藥不能阻止肺炎球菌、乙型鏈球菌、肺炎克氏菌、流感桿菌等致病菌的小鼠急性感染死亡，但連續(xù)給藥二日，每日三次，則可明顯減少其死亡數(shù)。在體外能抑制或延緩某些與呼吸道感染有關(guān)病毒的致細胞病變作用，在體內(nèi)能顯著減輕流感病毒所致小鼠的肺炎程度，且能特異性抑制流感病毒在鼠肺內(nèi)的增殖量，為該藥物治療上感及流行性感冒提供了藥效學(xué)的依據(jù)。實驗材料1、動物昆明種健康小白鼠，體重18—22g，雌雄兼用，(清潔級，合格證號為〈京動字〉第8806M35號〉。Wistar-Imamich系大白鼠，體重200g左右，(清潔級，合格證號為〈京動字〉第8806R011號〉。大耳白兔體重1.7—2.2kg，以上均由內(nèi)蒙古大學(xué)實驗動物中心提供。2、藥品與試劑以下藥效實驗所用的本發(fā)明中藥組合物為實施例2的糖漿劑，試驗所用劑量均指每千克受試體所用生藥量；氫化可的松琥珀酸鈉市售。消炎痛由黃河制藥廠生產(chǎn)，0.3g/粒，批號960410。啤酒酵母由北京啤酒廠生產(chǎn)。阿斯匹林由赤峰制藥廠生產(chǎn)，25mg/片，批號980602—4。傷寒付傷寒甲乙三聯(lián)菌苗北京生物制品研究所生產(chǎn)，針劑，批號961-6。大青葉合劑市售，由山東省淄博人民制藥廠生產(chǎn)，批號970308，10ml/支，0.9g生藥/ml。菌種乙型鏈球菌lll，金黃色葡萄球菌107，肺炎球菌01—16，肺炎克氏桿菌75—14，(以上細菌均為臨床分離)。流感桿菌530，傷寒桿菌50094，痢疾桿菌51582，金黃色葡萄球菌26003，綠膿桿菌10104，乙型溶血性鏈球菌32210，白色念株菌10231，肺炎雙球菌31002和肺炎桿菌46114等8株菌，由中國藥品生物制品檢定所提供。取上述菌株經(jīng)37'C培養(yǎng)18—24小時后，取lml菌株培養(yǎng)液+肉湯培養(yǎng)NS9ml，然后10倍稀釋至10—5，10—6，和1(T備用，不同菌種選用不同的濃度，在該濃度下的細菌量不一樣，故最后用細菌數(shù)表示。肉湯培養(yǎng)基由中國藥品生物制品檢定所生產(chǎn)制備的干燥培養(yǎng)基，用蒸餾水稀釋至合適濃度備用。病毒流感病毒亞甲型鼠肺適應(yīng)株FMh單純皰疹病毒I型(HSV-I)和II型(HSV-II)、腸道病毒ECHOu，CoxB4、B5、B6,病毒毒種購自中國藥品生物制品檢定所，實驗室保存于-6(TC低溫冰箱。細胞H印-2傳代細胞。由衛(wèi)生部生物制品檢定所提供。免疫血清用雞胚尿囊液傳代的FM,病毒免疫家兔，獲得高效價的免疫血清，凍存于-40'C冰箱。標記抗體羊抗體IgG-FITC,上海生研所提供。4'C保存?zhèn)溆谩＜t霉素(純品，由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院抗菌素研究所提供)氨芐青霉素(太原制藥廠，批號990S04)慶大霉素(山東濟南第二制藥廠，批號991007)3、實驗方法和結(jié)果(1)抗炎作用①對巴豆油致小鼠耳廓腫脹的影響取昆明種小鼠40只，體重22g左右，雌雄不限，隨機分為4組，分別灌胃(ig.)生理鹽水(NS.)，本發(fā)明的v藥組合物10g/kg和20g/kg，氫化可的松琥珀酸鈉20mg/kg，連續(xù)三次(第一天上、下午和第二天上午各l次)，于末次給藥后l小時，每鼠左耳廓的兩面涂以2%的巴豆油乙醚溶液0.05ml致炎。于致炎后4小時將小白鼠頸錐脫臼致死，至耳廓基線剪下兩耳，用直徑9mm的眼角膜打孔器分別在同一部位打下兩側(cè)耳片，稱重(mg)。兩耳重量之差即為耳廓腫脹度，通過t檢驗比較給藥組和對照組之間腫脹程度的差異。同時以對照組耳廓腫脹計為100%，計算藥物對鼠耳腫脹的抑制率。結(jié)果如表l所示。當(dāng)給予本發(fā)明的中藥組合物10g/kg后，小鼠耳廓腫脹程度明顯減輕，與對照組比較有非常顯著性差異，其抑制率達18.9%。對照組耳廓腫脹度-給藥組耳廓腫脹度抑制率％=_X100%對照組耳廓腫脹度表l.本發(fā)明的中藥組合物對巴豆油致炎小鼠耳廓腫脹的影響(11=10，S士SD)H<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>②對毛細血管通透性的影響取雄性小鼠32只，體重18—22g，隨機分為4組，分別ig.NS.、本發(fā)明的中藥組合物IO和20g/kg以及消炎痛30mg/kg后40分鐘，尾靜脈注射O.5%伊文思蘭0.2ml/20g體重，并立即ip.0.25X的醋酸溶液0.8ml/20g體重。30分鐘后處死動物，抽取10mlNS.沖洗腹腔，收集沖洗液離心，取上清液在590nm下比色。讀取吸光度(A)，與對照組比較，測其顯著性差異。結(jié)果可見，小dig.本發(fā)明的中藥組合物10g/kg后，A值與對照組比較有顯著性差異，說明伊文思蘭通過毛細血管進入腹腔的量明顯減少。從而看出，本發(fā)明的中藥組合物10g/kg具有明顯抑制毛細血管通透性的作用。其抑制率達32.2%。30mg/kg消炎痛也有明顯抑制作用，抑制率為29.6%?？梢姳景l(fā)明的中藥組合物對醋酸引起的毛細血管通透性有明顯的抑制作用(表2)。對照組吸光度一給藥組吸光度抑制率％=_X100%對照組吸光度表2.本發(fā)明的中藥組合物對醋酸致毛細血管通透性增加的影響(11=8，^土SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>(2)解熱作用①對啤酒酵母致大鼠體溫升高的影響取200g左右的Wistar大鼠，雌雄各半，按體重和體溫隨機分為4組，測定兩次正常體溫后，均背部皮下注射10X酵母混懸液10ml/kg以致熱，3小時后分別ig.1XCMC(羧甲基纖維素)、本發(fā)明的中藥組合物10和20g/kg,以及阿斯匹林O.15g/kg。測定給藥后l、2、3、4和5小時(即給酵母后的第4、5、6、7和8小時)的體溫。與給藥前的基礎(chǔ)體溫相比，計算給藥后不同時間體溫的變化值，測定對照組和給藥組相應(yīng)時間的體溫變化值差異。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，給藥后2小時，ig.本發(fā)明的中藥組合物大鼠的體溫明顯低于對照組，作用維持3小時左右，0.15g/kg阿斯匹林也有明顯抑制作用，兩者的作用強度和維持時間相似(表3)。表3.本發(fā)明的中藥組合物對酵母致大鼠體溫升高的影響(n=8，2±SD)(°C)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>②對三聯(lián)菌苗致兔體溫升高的影響取體重1.7—2.2kg的大耳白兔32只(經(jīng)預(yù)先測試體溫合格者)，按表13-4隨機分為4組，分別ig.同體積NS.、阿斯匹林60mg/kg、本發(fā)明的中藥組合物10和20g/kg后，立即經(jīng)耳靜脈注射三聯(lián)菌苗1.2ml/kg，記錄給藥后l、2、3、4、5、6和7小時的體溫，計算給藥(或NS.)前的基礎(chǔ)體溫及給藥后體溫的變化值，與對照組的體溫變化值相比，做t檢驗。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，ig.本發(fā)明的中藥組合物10g/kg2小時后，對三聯(lián)菌苗引起的家兔體溫升高有明顯的抑制作用，作用維持3小時以上。阿斯匹林60mg/kg也有明顯的抑制作用，與10g/kg本發(fā)明的中藥組合物的作用強度相似，但維持時間不如20g/kg的本發(fā)明的中藥組合物強(表4)。表4本發(fā)明的中藥組合物對三聯(lián)菌苗致家兔體溫升高的影響(n=8，X±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>(3)體內(nèi)外抑菌試呤①體內(nèi)抑菌試驗將致病菌以最小致死量(1MLD)注入鼠腹腔，使其感染后，采用一次口服和多次口服二種方法，觀察本發(fā)明的中藥組合物對小鼠的體內(nèi)抑菌情況，對照組給予生理鹽水lml/只。尋找小鼠對本發(fā)明的中藥組合物的最大耐受量口服給藥最大耐受量由急性毒性試驗結(jié)果可知，小鼠一次口服的最大耐受量為40g生藥/kg。腹腔給藥最大耐受量取小鼠30只，分6組，每組5只，藥液為6種濃度lml/只/次，0.8ml/只/次，0.6ml/只/次，0.4ml/只/次，0.2ml/只/次，0.lml/只/次，24小時后，觀察生存結(jié)果lml/只/次，0.8ml/只/次，0.6ml/只/次，0.4ml/只/次，注射藥后30分鐘5小時，多數(shù)死亡。0.2ml/只/次，O.lml/只/次，24小時后有90%及100%存活。確定腹腔注射藥液小鼠最大耐受量為O.2ml/只/次，B卩10g生藥/kg。菌液的制備將選好的菌接種于含10%馬血清的培養(yǎng)基中。采用牛肉浸膏湯培養(yǎng)基(含牛肉膏0.3%和蛋白棟1%，調(diào)ph為7.4，經(jīng)高壓滅菌備用)，作為稀釋藥物之用。將菌接種培養(yǎng)基后，加10%馬血清，37。C孵育18小時，作為原菌液，用肉湯稀釋成1:200為試驗菌液，該試驗菌液置4"C冰箱保存。臨感染前，制備感染菌液將試驗菌液接種于10ml含10X馬血清的新鮮牛肉湯培養(yǎng)基中，置37。C增菌6小時，然后取小量菌液轉(zhuǎn)種于20ml10%馬血清肉湯中，孵育18小時，作為感染菌原液，除了肺炎球菌，乙型鏈球菌用原液外，肺炎克氏菌、流感桿菌、金黃色葡萄球菌均用5%胃膜素(mucin)稀釋成使9(T100%小鼠致死的菌濃度為感染菌液。各菌最小致死量(1MLD):乙型鏈球菌18小時培養(yǎng)后原液不稀釋，0.35ml/只。肺炎球菌18小時培養(yǎng)后原液不稀釋，0.4ml/只。流感桿菌、金黃色葡萄球菌、肺炎克氏菌18小時培養(yǎng)后，力卩5%胃膜素稀釋，0.5m1/乂>>o方法是乙型鏈球菌、肺炎球菌，以8個濃度，lml/只、0.8ml/只、0.6ml/只、0.5ml/只、0.4ml/只、0.3ml/只、0.2ml/只、0.lml/只，直接注入腹腔，觀察24小時后存活死亡數(shù)。流感桿菌、金黃色葡萄球菌、肺炎克氏菌，是將菌液用肉場培養(yǎng)基以10倍稀釋為10一1、10-2、10—3，再以菌液lml加5X胃膜素9ml，稀釋為10—2、10—3、10—4做為均勻的菌懸液。將不同菌懸液腹腔注入小鼠，每濃度5只，每只0.5ml，然后觀察24小時、48小時后存活死亡數(shù)，找出最小致死量(1MLD)，即感染后引起80100%死亡的菌懸液濃度。實驗治療將各致病菌以最小致死量(1MLD)注入小鼠腹腔，使其感染，后采用一次口服、多次口服二種方法，觀察感寧顆粒對小鼠的抑菌情況。方法一小鼠隨機分四組，每組10只，用兩種口服劑量，每鼠染菌后，同時口服給藥一次，觀察24小時、48小時死亡數(shù)，結(jié)果見表5。表5口服給藥一次小鼠體內(nèi)抑菌作用ijl24小時"48小時~~~~"死亡數(shù)/頭'驗數(shù)(只)處亡率(%)~~死亡數(shù)/^'驗數(shù)(只)處亡率W)方法二小鼠隨機分四組，每組10只，每組小鼠染菌后，用兩種口服劑量同時口服給藥一次，3次/日，間隔8小時一次，連續(xù)給藥二日后，停藥，觀察24及48小時后小鼠死亡數(shù)，結(jié)果見表6。9/109010/10100100mg/kg1/10***101/10***1010g/kg9/109010/1010020g/kg9/109010/101008/10809/1090100mg/kg1/10***102/10***2010g/kg9/109010/1010020g/kg10/1010010/10100肺炎球菌乙型鏈菌藥組素明物照霉發(fā)合對紅本組藥rTTjFJT.j經(jīng).S3經(jīng)組素明物照霉發(fā)合對紅本組表6口服給藥二日小鼠體內(nèi)抑茵作用組別24小時48小時死亡數(shù)/實驗數(shù)(只)死亡率(%)死亡數(shù)/實驗數(shù)(只)死亡率(%)結(jié)論小鼠體內(nèi)抑菌試驗結(jié)果表明本發(fā)明的中藥組合物一次給藥不能阻止肺炎球菌、乙型鏈球菌、肺炎克氏菌、流感桿菌等致病菌的小鼠急性感染死亡，但連續(xù)給藥二日，每日三次，則可明顯減少其死亡數(shù)。感染后24小時、48小時的本發(fā)明的中藥組合物實驗各組與對照組比較均有顯著性差異(多數(shù)P〈0.01、P<0.001，少數(shù)P〈0.05)。其中體內(nèi)抑流感桿菌的作用與氨芐青霉素相似，體內(nèi)抑肺炎克氏菌的作用與慶大霉素相似。②體外抑菌試驗采用試管肉湯培養(yǎng)基法實驗，本發(fā)明的中藥組合物配成lg生藥/ml的溶液，用肉湯作l:l(菌液6ml+肉湯培養(yǎng)基6ml)稀釋后，逐管2倍稀釋成0.55、0.275、0.138、0.0688和0.0344g生藥/ml的濃度，總體積6ml，分別加入各菌株稀釋液0.1ml，混勻后連同一只加培養(yǎng)基的對照管一起在37。C恒溫箱中溫孵18小時，通過肉眼觀察并用平皿劃痕法接種細菌，培養(yǎng)后看是否有細菌以最終判定所接種的細菌數(shù)。結(jié)果如表5所示，本發(fā)明的中藥組合物對乙型溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌和肺炎桿菌有較強的抑制作用，其次為白色念株菌、綠膿桿菌和肺炎雙球菌。對傷寒桿菌、志賀氏痢疾桿菌的作用最弱。在相同濃度下，大青葉的作用與本發(fā)明的中藥組合物相似(表7)。7/10701/10***103/10*301/10***108/10801/10*承*103/10*承302/10林209/10902/10氺承承203/10**氺302/10承*氺2010/101002/10***204/10***403/10承承*3010/101001/10*林105/10***504/10氺木氺408/10801/10***104/10*404/10*409/10902/10承mc承204/10氺承402/10氺氺氺2010/101002/10承氺氺204/10承*承40《，*30肺炎球菌乙型鏈菌肺炎克氏菌流感桿菌組的中藥組100mg/kg10g/kg20g/kg組的中藥組100mg/kg10g/kg對照組慶大霉素組本發(fā)明的中藥組合物組20g/kg100mg/kg10g/kg20g/kg對照組氨芐青霉素組本發(fā)明的中藥組合物組800萬/kg10g/kg20g/kg且SkK月RdRdikiiHcRd照霉發(fā)物照霉發(fā)物對紅本合對紅本合表7本發(fā)明的中藥組合物的體外抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>注(+)為有細菌，(一)為無細菌生長菌量為最后平皿劃線法證實細菌A為本發(fā)明的中藥組合物(4)抗病毒作用試驗本發(fā)明的中藥組合物的抗病毒作用，選擇與呼吸道感染有關(guān)的病毒株，進行了體外組織培養(yǎng)和體內(nèi)動物試驗，現(xiàn)將實驗結(jié)果報告如下。①體外試驗-對H印-2培養(yǎng)細胞的毒性試驗將本發(fā)明的中藥組合物配成lg生藥/ml的藥液，再以Eagles培養(yǎng)液作l:2l:512倍比稀釋。將96孔微量培養(yǎng)板已長成的H印-2細胞單層的培養(yǎng)液倒掉，加入不同稀釋度的藥液50pl，每個稀釋度藥液各加入四孔細胞，再加入Eagles培養(yǎng)液50yl。同時設(shè)正常細胞對照。將培養(yǎng)板置37'C5XC02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)四天，每日用倒置顯微鏡觀察藥液對細胞的影響，以細胞不出現(xiàn)退變的最小稀釋度判為該藥對細胞的無毒界限。通過毒性試驗觀察到，1:128、1:256、l:512(即8mg、4ms、2mg/ml)三種稀釋度的藥液對細胞無影響，故取這三種稀釋度藥液作抗病毒試驗用。對病毒致細胞病變作用的影響將已長成單層的細胞培養(yǎng)液倒掉，取20TCIDs。的不同病毒液50yl接種到每孔細胞上，每個稀釋度的病毒液接種4孔，置37'C5XC02培養(yǎng)箱中吸附1小時，將病毒液倒掉，用不含小牛血清的Eaglcs維持液洗細胞面三次，加入1:128、1:256、1:512稀釋度藥液50u1，每稀釋度接種四孔，再加入50ul維持液。同時設(shè)病毒、藥液、正常細胞對照。置37"C5^C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)四天，每日在倒置顯微鏡下鏡檢一次，觀察細胞病變，連續(xù)四天。按試驗孔第四天不出現(xiàn)細胞病變者，判為有抑制作用(+)，試驗孔比病毒對照孔晚48小時以上出現(xiàn)病變者并延長細胞病變時間的，判為能延緩病變的產(chǎn)生(±)，否則判為無抑制細胞病變作用。結(jié)果可見，該藥8mg/ml時，對腸道病毒ECHOn所致細胞病變有抑制作用。對CoxB"CoxB5、CoxB6所致細胞病變有延緩作用，對皰疹病毒HSV-I、HSV—II無抑制作用。2、4mg/ml對所用6種病毒均無抑制作用(表8)。表8.本發(fā)明的中藥組合物對病毒所致細胞病變的影響藥物濃度1i<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>注"+"有抑制作用~""_"無抑制作用"""±"有延緩作用②體內(nèi)試驗對小鼠流感病毒性肺炎的作用將小鼠50只，按體重隨機分成五組，三組為試驗組，分別給予本發(fā)明的中藥組合物8、16、32g生藥/kg(中劑量組按人與動物的體重比值換算成的相當(dāng)于臨床等效劑量，大劑量為其一倍，小劑量為其1/2)，一組為病毒感染對照組，給同體積蒸餾水，一組為陽性對照藥病毒唑組。將小鼠用乙醚輕度麻醉后，用15個LDs。流感病毒鼠肺適應(yīng)株FMi病毒液滴鼻感染，每鼠0.05ml。從感染前一天起給藥或給水，每天2次，每次0.5ml，連續(xù)3天，第4天稱取小鼠體重后解剖，肉眼觀察肺部病變，記錄肺部肝樣實變的程度，摘取全部稱重，逐個計算肺指數(shù)和抑制率。肺指數(shù)^肺重(g)/體重(g)X100對照組肺指數(shù)均值-試驗組肺指數(shù)均值肺指數(shù)抑制率=-X100%對照組肺指數(shù)均值肺指數(shù)值大，表示肺重量也大，肺病變程度就嚴重。將各組肺指數(shù)進行組間t檢驗。表9本發(fā)明的中藥組合物對小鼠流感病毒感染肺指數(shù)的影響(n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>結(jié)果表明，本發(fā)明的中藥組合物三個劑量組動物的肺指數(shù)值均低于對照(中劑量組P〈0.0K大劑量組p〈0.001)，并隨用藥劑量的增加，肺指數(shù)值相應(yīng)減少。對鼠肺內(nèi)流感病毒增殖量的影響除病毒感染量為1000LDs。外，動物分組、給藥方法、藥物劑量等均同1。感染病毒后48小時處死小鼠，解剖取肺，摘取左側(cè)中葉肺固定，按病理切片常規(guī)固定、脫水、包埋、制作石蠟切片。以間接免疫熒光法染色，以熒光素標記的抗流感病毒血清作示蹤原，通過間接免疫熒光結(jié)合，觀察感染鼠肺內(nèi)特異的病毒抗原，判斷藥物對病毒增殖的作用，熒光陽性數(shù)多，表明病毒顆粒增殖多，并作組間比較。對照組特異性熒光比率一試驗組特異性熒光比率抑制率(％)=對照組特異性熒光比率表IO.本發(fā)明的中藥組合物對小鼠肺內(nèi)流感病毒增值量的影響組別劑量(g/kg/d)特異性熒光比率(％)抑制率(％)病毒對照組0.0053.06病毒唑0.0731.38***肌86本發(fā)明的中藥組合物837.49承29.341639.32*25.893231.60***40.44結(jié)果表明，本發(fā)明的中藥組合物三個劑量組對小鼠肺內(nèi)流感病毒增殖量均有顯著的抑制作用，大劑量組32g/kg的作用強度與陽性對照藥病毒唑70mg/kg組相近似。體內(nèi)組織培養(yǎng)試驗表明，本發(fā)明的中藥組合物能夠抑制20TCIDs。腸道病毒ECHOu，延緩CoxB4、CoxB5、CoxBe有關(guān)病毒的致細胞病變作用。流感病毒經(jīng)呼吸道感染小鼠后，引起小鼠病毒性肺炎，隨著炎癥的進展，肺部滲出增加，肺重量增加，以肺重除以體重，即肺指數(shù)值可以反應(yīng)肺病變的嚴重程度，肺指數(shù)值越大，表示肺病變程度越嚴重，對給藥組來說，肺指數(shù)值越小，表明藥物對病毒性肺炎的抑制作用越強。但肺指數(shù)值還受其它因素的影響，因此，我們又用特異性免疫熒光法進一步觀察鼠肺內(nèi)復(fù)制的病毒顆粒含量，反應(yīng)藥物對病毒增殖的抑制程度。特異性熒光比率越高，則表示病毒增殖量越大，給藥組特異性熒光比率越低則說明藥效強度越大。數(shù)據(jù)處理采用t檢驗及方差分析(q檢驗)。結(jié)論上述藥效學(xué)實驗結(jié)果表明，本發(fā)明的中藥組合物可明顯減輕小鼠耳廓腫脹程度，抑制毛細血管通透性，抑制酵母致大鼠體溫升高；對乙型溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌、肺炎桿菌、白色念株菌和肺炎雙球菌有較強抑制作用，可提高抗感染能力；體內(nèi)抑流感桿菌的作用與氨芐青霉素相似，體內(nèi)抑肺炎克氏菌的作用與慶大霉素相似。在體外能抑制或延緩某些與呼吸道感染有關(guān)病毒的致細胞病變作用，在體內(nèi)能顯著減輕流感病毒所致小鼠的肺炎程度，且能特異性抑制流感病毒在鼠肺內(nèi)的增殖量。為該藥治療上感及流行性感冒提供了藥效學(xué)依據(jù)。權(quán)利要求1、一種中藥組合物，其特征在于，所述中藥組合物是由下述原料藥材制得葛根80-130重量份板蘭根70-110重量份北豆根或山豆根60-120重量份蘆根70-115重量份白茅根65-100重量份霍香70-120重量份紅花70-110重量份大黃10-50重量份。2、根據(jù)權(quán)利要求l所述的中藥組合物，其特征在于，所述原料藥材為葛根85-120重量份板蘭根80-100重量份北豆根或山豆根70-115重量份蘆根75-110重量份白茅根70-95重量份藿香75-115重量份紅花75-105重量份大黃15-45重量份。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的中藥組合物，其特征在于，所述原料藥材為葛根85-100重量份板蘭根85-95重量份北豆根或山豆根85-105重量份蘆根80-105重量份白茅根75-95重量份藿香80-110重量份紅花80-100重量份大黃20-40重量份。4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的中藥組合物，其特征在于，所述原料藥材為葛根85-95重量份板蘭根90-95重量份北豆根或山豆根90-100重量份蘆根85-100重量份白茅根80-95重量份藿香85-105重量份紅花85-95重量份大黃25-35重量份。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的中藥組合物，其特征在于，所述原料藥材為葛根90重量份板蘭根90重量份北豆根或山豆根90重量份蘆根90重量份白茅根90重量份藿香90重量份紅花90重量份大黃30重量份。6、根據(jù)權(quán)利要求l所述的中藥組合物，其特征在于，所述原料藥中的藿香為廣藿香。7、根據(jù)權(quán)利要求1至6中任意一項所述的中藥組合物，其特征在于，該中藥組合物為下述任意一種劑型顆粒劑；膠囊劑；片劑；丸劑；煎膏劑；糖漿劑；合劑；酒劑；流浸膏劑;浸膏劑；散劑；滴丸；噴霧劑；注射劑等。8、權(quán)利要求l-7中任意一項所述的中藥組合物的制備方法，其特征在于，該制備方法為取藿香加水4-12(w/v)倍量浸泡0.5-3小時，蒸餾提取3-6小時，將提取得到的揮發(fā)油備用；蒸餾后的水溶液及藥渣分別另器收集；葛根用30-95%的乙醇回流提取1_3次，每次加乙醇4-12倍量(w/v)回流0.5-5小時，藥液藥渣備用；大黃用4-12(w/v)倍量50-80X乙醇回流提取l-2次，每次0.5-l小時，藥渣藥液備用；將上述蒸餾提取及乙醇提取后備用的藥渣與其余五味藥材合并，加水4-12倍量浸泡0.5-3小時，煎煮1-3次，每次0.5-3小時，合并所有水煎液及蒸餾提取揮發(fā)油后的藿香水溶液，濃縮至相對密度約1.0-1.2，加入乙醇使含醇量達到40-70%，取上清液回收乙醇后備用；合并以上藥液，加水至1000mL攪勻，冷藏12-72小時后過濾，濾液備用。另取適量吐溫-80與揮發(fā)油充分混和均勻后加入加熱至50-75'C左右的藥液中，待充分溶解后，補足水量至1000ml，冷藏，濾過，灌裝，滅菌，制成所需劑型?；蛉∞较慵铀?-12(w/v)倍量浸泡0.5-3小時，蒸餾提取3-8小時，將提取得到的揮發(fā)油加入5-25倍e環(huán)糊精制成的水飽和溶液中，30-6(TC下攪拌1-5小時進行包合，得到揮發(fā)油包合物；蒸餾后的水溶液及藥渣分別另器收集；葛根用30_95%的乙醇回流提取1-3次，每次加乙醇4-12倍量(w/v)回流0.5-5小時，藥液藥渣備用；大黃用4-12(w/v)倍量50-80X乙醇回流提取l-2次，每次0.5-l小時，藥渣藥液備用；將上述蒸餾提取及乙醇提取后備用的藥渣與其余五味藥材合并，加水4-12倍量浸泡0.5-3小時，煎煮l-3次，每次0.5-3小時，合并所有水煎液及蒸餾提取后的水溶液，濃縮至相對密度約1.0-1.2,加入乙醇使含醇量達到40-70%，取上清液回收乙醇后備用；合并以上藥液，濃縮，濃縮物中加入上述揮發(fā)油包合物以及任選的適量輔料以制成所需劑型。9、權(quán)利要求l-7中任意一項所述的中藥組合物在制備治療流感或上呼吸道感染的藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明公開了一種新的治療流感、上感的中藥組合物及其制備方法，所述組合物是以葛根、板蘭根、北豆根、蘆根、白茅根、藿香等中藥材為原料，根據(jù)各中藥材有效成分的不同理化性質(zhì)，經(jīng)提取、濃縮和成型工藝處理后，制備而成的臨床可接受的制劑。本發(fā)明配方獨特，治療效果顯著。文檔編號A61P11/00GK101352534SQ20071013019公開日2009年1月28日申請日期2007年7月24日優(yōu)先權(quán)日2007年7月24日發(fā)明者鄭秀萍申請人:鄭秀萍