專利名稱：一種疫苗耐熱凍干保護(hù)劑及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種疫苗耐熱凍干保護(hù)劑，尤其是ー種豬瘟疫苗耐熱凍干保護(hù)劑，及其制備方法，屬于獸藥生產(chǎn)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
目前，在我國(guó)獸用生物制品中，活的凍干疫苗占相當(dāng)大的比例，國(guó)內(nèi)常用的保護(hù)劑主要為牛奶、蔗糖、明膠等，組方簡(jiǎn)單，保護(hù)功能差。如果在2°C 8°C條件下，保存期只有4 6月，多需要在_15°C以下保存。加上國(guó)內(nèi)傳統(tǒng)的獸用生物制品保護(hù)劑的研制相對(duì)滯后，使成品的長(zhǎng)期保存和運(yùn)輸受限。所以，耐熱凍干保護(hù)劑的研究是非常急需的，在20世紀(jì)80年代，發(fā)達(dá)國(guó)家就已開始進(jìn)行耐熱凍干保護(hù)劑的研究。我國(guó)在耐熱凍干保護(hù)劑方面的研究起步較晚，加上中國(guó)市場(chǎng)巨大，國(guó)外生物制品涌入，市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)加劇。為了本國(guó)生物制品業(yè)的生存和發(fā)展，新型有效的耐熱凍干保護(hù)劑的研究和應(yīng)用顯得尤為迫切。耐熱凍干保護(hù)劑的種類按分子量分類分為低分子量和高分子量化合物以及天然混合物和其它物質(zhì)。低分子量化合物，又可以分為酸性物質(zhì)、中性物質(zhì)和堿性物質(zhì)。酸性物質(zhì)主要為谷氨酸、天冬氨酸、蘋果氨酸、乳酸等；中性物質(zhì)主要為葡萄糖、肌醇、乳糖、蔗糖、棉籽糖、海藻糖、山梨醇DL-蘇氨酸、肌醇、木糖醇等；堿性物質(zhì)主要為精氨酸和組氨酸等；高分子化合物主要為白蛋白、鼓性蛋白、明膠、蛋白陳。可溶性淀粉、糊精、肉汁、果膠、阿拉伯膠、羥甲基纖維素(CMC)、藻類等；天然混合物如脫脂牛奶、血清等；其它物質(zhì)如抗壞血酸、半胱氨酸、羥胺、胺基源等。低分子化合物在凍干過程中直接發(fā)揮作用，高分子化合物促進(jìn)低分子化合物的保護(hù)作用。一般制備保護(hù)劑時(shí)，多將低、高分子化合物配合使用。其它ー些物質(zhì)是為了防止對(duì)凍干活性物質(zhì)有害的胺基、羥基起氧化反應(yīng)，可選擇添加使用。按保護(hù)劑功能和性質(zhì)分類分為填充劑、防凍劑、抗氧化劑、酸堿調(diào)整劑、緩沖劑、羥基中和剤。填充劑能防止有效物質(zhì)隨水蒸氣一起升華飛散并使之成形，如甘露醇、乳糖、明膠等；防凍劑能防止和減少冷凍過程結(jié)晶水的形成，如甘油、ニ甲亞砜(DMS0)、蔗糖、聚こ烯吡咯烷酮(PVP)等；抗氧化劑能防止保存過程中的氧化反應(yīng)，如維生素D、維生素E、蛋白質(zhì)水解物、硫代硫酸鈉等；酸堿調(diào)整劑能將PH值調(diào)整到活性物質(zhì)的最穩(wěn)定區(qū)域，如磷酸、山梨醇、EDTA (こニ胺四醋酸ニ納)、氨基酸等；其他物質(zhì)如葡聚糖、脫脂乳、谷氨酸鈉、硫服、碘化鉀等。低聚木糖又稱木寡糖由2-7個(gè)木糖分子以β-1，4糖苷鍵結(jié)合而成的功能性聚合糖。酸、熱穩(wěn)定性好，難發(fā)酵，與其他低聚糖相比，低聚木糖的突出特點(diǎn)是穩(wěn)定性非常好。即使在酸性條件下(ΡΗ=2. 5-7)加熱至100°C也基本不分解，根據(jù)文獻(xiàn)，低聚木糖中的木三糖、木ニ糖和木糖都有還原性，木四糖以上沒有。亞硒酸鈉研究表明，硒顯著地影響免疫系統(tǒng)所包含的全部三種調(diào)節(jié)機(jī)制，即細(xì)胞免疫、體液免疫和非特異免疫。硒還能促進(jìn)淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體，使血液免疫球蛋白水平增高或維持正常，因此臨床中給腫瘤患者適量補(bǔ)硒，可有效提高患者機(jī)體免疫功能，增強(qiáng)機(jī)體防癌和抗癌能力。硒作為谷胱甘肽過氧化酶的成分，具有抗氧化作用；調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤作用。硒具有抗氧化作用，參與輔酶QlO的合成，保持細(xì)胞膜完整性，維持動(dòng)物肌體的正常生長(zhǎng)發(fā)育，缺硒可引發(fā)多種疾病和癌癥。硒是人體免疫調(diào)節(jié)營(yíng)養(yǎng)素，既能激活細(xì)胞免疫中淋巴細(xì)胞，又能刺激免疫球蛋白及抗體產(chǎn)生。免疫調(diào)節(jié)作用是通過抗氧化劑輔酶Q、半胱氨酸、維生素E來完成，而這些都要在硒的參與下才能激活，缺硒必然導(dǎo)致免疫力下降，各類疾病相繼出現(xiàn)。硒不但能維持動(dòng)物體正常的生長(zhǎng)發(fā)育，與機(jī)體抗氧化機(jī)制密切相關(guān)，還能提高動(dòng)物的體液免疫和細(xì)胞免疫功能，增強(qiáng)機(jī)體對(duì)傳染性疾病的抵抗能力，是加強(qiáng)機(jī)體免疫系統(tǒng)和抗感染能力必不可少的微量元素之一。補(bǔ)硒能增強(qiáng)體液免疫。給動(dòng)物補(bǔ)硒能夠提高羊紅細(xì)胞抗原，還能提高免疫球蛋白(IgM、IgA)的含量。豬瘟疫苗耐熱凍干保護(hù)劑的研究，常現(xiàn)用5%蔗糖脫脂奶為保護(hù)劑的豬瘟細(xì)胞凍干疫苗，在2°C 8°C保存僅12個(gè)月，加耐熱凍干保護(hù)劑疫苗，在2°C 8°C可保存2年后。說明耐熱凍干保護(hù)劑比常規(guī)的保護(hù)劑更能有效地保護(hù)疫苗，保存時(shí)間更長(zhǎng)久。耐熱凍干保護(hù)劑的種類和配比是影響疫苗的質(zhì)量和保存效果的重要因素。凍干保護(hù)劑可影響生物制品的質(zhì)量、效價(jià)和穩(wěn)定性，改變生物制品的生產(chǎn)エ藝，提高產(chǎn)品預(yù)測(cè)能力并增大產(chǎn)品批次間的穩(wěn)定性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種疫苗耐熱凍干保護(hù)劑，尤其是ー種豬瘟疫苗耐熱凍干保護(hù)劑，目的是將疫苗耐熱凍干保護(hù)劑與豬瘟弱毒疫苗混合，解決豬瘟活疫苗僅能在-I 5°C條件下保存和運(yùn)輸?shù)募夹g(shù)瓶頸。一種疫苗耐熱凍干保護(hù)劑，制成的疫苗凍干生產(chǎn)液成分為羧甲基纖維素鈉I 2 %、低聚木糖4 6 %、谷氨酰胺I 2 %、亞硒酸鈉0.2 0.4%，余量為蒸餾水。上述疫苗耐熱凍干保護(hù)劑的制備方法如下I)將羧甲基纖維素鈉3 6 %，作為A液；
2)將低聚木糖I2 I 8 %，作為B液；
3)谷氨酰胺3 6%，亞硒酸鈉0 . 6 I . 2 %，作為C液；
4)將A液、B液和C液，按I:I :1 (V/V)構(gòu)成疫苗耐熱凍干保護(hù)劑；
上述疫苗耐熱凍干保護(hù)劑的應(yīng)用，將疫苗凍干保護(hù)劑按3:1 (V/V)與豬痕疫苗病毒液混合，制成豬瘟凍干疫苗生產(chǎn)液。 將上述豬瘟凍干疫苗生產(chǎn)液分裝后進(jìn)行冷凍干燥。產(chǎn)品在2 8°C保存24個(gè)月，仍保持凍干后的外形，病毒含量均超過國(guó)家獸醫(yī)生物制品規(guī)程的標(biāo)準(zhǔn)。凍干前后病毒損失率低，凍干產(chǎn)品耐老化程度高，產(chǎn)品在2 8で保存2 4個(gè)月，病毒含量不發(fā)生改變。本發(fā)明解決豬瘟活疫苗僅能在-I 5 °C條件下保存和運(yùn)輸?shù)募夹g(shù)瓶頸。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I豬瘟疫苗耐熱凍干疫苗的制備
I)將市售化學(xué)純羧甲基纖維素鈉按4 8%與去離子水混合，98 100°C，加熱30min，冷卻至室溫(20°C )，作為A液。2)將市售食品級(jí)低聚木糖按4 8%與去離子水混合，攪拌混勻，作為B液。
3)將谷氨酰胺按4 8%，亞硒酸鈉按0. 8 I. 6%，與去離子水混合，攪拌混勻，作為C液。4)將A液、B液和C液，按1:1 :1 (V/V)作為疫苗凍干保護(hù)劑。5)將疫苗凍干保護(hù)劑按3:1 (V/V)與豬瘟疫苗病毒液混合，制成豬瘟凍干疫苗生產(chǎn)液。6)分裝后進(jìn)行冷 凍干燥。7)密封、包裝。-20V -40V冷凍保存，或2°C 8°C保存。
權(quán)利要求
1.一種疫苗耐熱凍干保護(hù)劑，其特征在于耐熱凍干保護(hù)劑由下述重量百分比的物質(zhì)混配而成羧甲基纖維素鈉I 2 %、低聚木糖4 6 %、谷氨酰胺I 2 %、亞硒酸鈉0.2 0.8%，余量為蒸餾水。
2.權(quán)利要求I所述的疫苗耐熱凍干保護(hù)劑的制備方法，包括如下步驟 1)將羧甲基纖維素鈉與蒸餾水混合，作為A液； 2)將低聚木糖與蒸餾水混合，作為B液； 3)將谷氨酰胺、亞硒酸鈉與蒸餾水混合，作為C液； 4)將A液、B液和C液按I:1 :1 (V/V)混合，作為耐熱凍干保護(hù)劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的制備方法，其特征在于步驟I)中，羧甲基纖維素鈉與蒸餾水在98°C 100°C混合，加熱30min，冷卻至室溫(20°C )，制成A液。
4.權(quán)利要求I所述耐熱凍干保護(hù)劑的應(yīng)用，其特征在于將疫苗凍干保護(hù)劑按3:1(V/V)與豬瘟疫苗病毒液混合，制成豬瘟凍干疫苗生產(chǎn)液。
5.權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于將上述豬瘟凍干疫苗生產(chǎn)液分裝后進(jìn)行冷凍干燥。
6.權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于豬瘟活疫苗在2 8で保存24個(gè)月。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種疫苗耐熱凍干保護(hù)劑及制備方法，尤其涉及一種豬瘟疫苗耐熱凍干保護(hù)劑，由下述重量百分比的物質(zhì)混配而成羧甲基纖維素鈉１～２％、低聚木糖４～６％、谷氨酰胺１～２％、亞硒酸鈉0.2～0.8％，余量為蒸餾水。其制備方法，包括如下步驟1)將羧甲基纖維素鈉與蒸餾水混合，作為A液；2)將低聚木糖與蒸餾水混合，作為B液；3)將谷氨酰胺、亞硒酸鈉與蒸餾水混合,作為C液；4)將A液、B液和C液按111(V/V)混合,作為耐熱凍干保護(hù)劑。本發(fā)明設(shè)計(jì)的豬瘟活疫苗耐熱凍干保護(hù)劑, 在凍干過程及保存過程會(huì)保持病毒活性,減緩豬瘟病毒弱毒活疫苗活性下降。
文檔編號(hào)A61K47/18GK102641504SQ201210108539
公開日2012年8月22日 申請(qǐng)日期2012年4月14日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月14日
發(fā)明者單虎, 常維山, 張傳美, 楊瑞梅, 秦曉冰, 韓先杰, 黃娟 申請(qǐng)人:青島農(nóng)業(yè)大學(xué)