專利名稱：：酚酸類化合物及其在制備抗補體藥物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種酚酸類化合物，尤其涉及一種酚酸類化合物及其在制備抗補體藥物中的用途。
背景技術(shù)：
：補體系統(tǒng)的過度激活會引發(fā)系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、急性呼吸窘迫綜合征等多種疾病?？寡a體藥物研究多年來一直是世界藥學(xué)研究的熱點和重點。目前對此類疾病尚無理想的治療藥物，因此臨床上急需高效、低毒、專一的新型補體抑制劑。直接從天然產(chǎn)物中研究開發(fā)補體抑制劑的成本低，并且大多數(shù)活性成分作為天然產(chǎn)物的一部分可以直接被機體消化吸收，因此近年來從天然來源中尋找新的具有抗補體活性的藥物受到人們越來越多的關(guān)注。國內(nèi)外的學(xué)者從包括海洋生物在內(nèi)的天然產(chǎn)物中分離得到大量的具有補體系統(tǒng)抑制作用的單體化合物，為抗補體藥物的研究與開發(fā)提供了廣闊的前景。白茅根為禾本禾斗(Gramineae)白茅屬(Imperata)植物白茅(ImperatacylindricaBeauv.var.major(Nees)C.Ε.Hubb.)的根莖，廣泛分布于全國各地，為中醫(yī)傳統(tǒng)常用中藥，具有涼血止血、清熱利尿的功能。主治血熱吐衄、熱淋尿血、熱病煩渴、黃疸、水腫、胃熱嘔吐、肺熱咳嗽、濕熱黃疸等。近年來國內(nèi)外學(xué)者對白茅根進(jìn)行了化學(xué)成分和藥理作用的研究，從中分離得到三萜類、黃酮及色原酮類、木脂素類、內(nèi)酯、有機酸以及留體類等化學(xué)成分。這些化學(xué)成分存在著廣泛的藥理作用，如細(xì)胞毒、抗谷氨酸鹽誘導(dǎo)新生鼠皮層細(xì)胞的神經(jīng)毒、抑制兔主動脈收縮、抑制5-脂肪氧化酶、降低血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、血管收縮抑制和抗血小板聚集、免疫調(diào)控作用等。臨床可單獨或與其他中藥合用用于治療急慢性腎炎、急性甲型肝炎、急性支氣管炎、肺結(jié)核咳血等疾病，但是迄今為止尚未見對補體系統(tǒng)具有抑制作用的化合物的報道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供兩種酚酸類化合物及其在制備抗補體藥物中的用途，該酚酸類化合物具有抗補體活性，對補體系統(tǒng)的經(jīng)典途徑有抑制作用。本發(fā)明的進(jìn)一步目的是提供上述白茅根中的酚酸類化合物在制備抗補體藥物中的用途。本發(fā)明應(yīng)用現(xiàn)代藥理篩選方法，對植物藥中抗補體活性物質(zhì)進(jìn)行研究，從白茅屬(Imperata)植物白茅根(ImperatacylindricaBeauv.var.major(Nees)C.Ε.Hubb.)的乙酸乙酯部位分離得到酚酸類活性物質(zhì)并證實其有對補體系統(tǒng)的經(jīng)典途徑有抑制作用。本發(fā)明是這樣來實現(xiàn)的，其特征是酚酸類化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)為<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>當(dāng)R1=C00H,R2=OCH3時，化合物為香草酸；當(dāng)R1=-CH=CH-COOH，R2=H時，化合物為對羥基桂皮酸。所述的香草酸、對羥基桂皮酸對補體系統(tǒng)的經(jīng)典途徑有抑制作用。本發(fā)明所述的酚酸類化合物通過下述方法制備取干燥白茅根10kg，切碎后用95%的乙醇加熱回流提取2次，第一次用10倍量乙醇提取2h，第二次用8倍量乙醇提取1.5h，合并提取液，減壓回收得浸膏，將浸膏混懸在水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇進(jìn)行萃取，合并乙酸乙酯萃取液濃縮至干即得乙酸乙酯萃取物56g。乙酸乙酯部位干法上樣進(jìn)行硅膠柱色譜，以石油醚(6090°C)_乙酸乙酯(100111)梯度洗脫，所得流分經(jīng)反復(fù)硅膠色譜、反相柱色譜以及凝膠柱純化，分離得到化合物香草酸和對羥基桂皮酸；其中，香草酸淡黃色粉末狀結(jié)晶(甲醇)。ESI-MSm/z169[M+H]+，1H-NMR(O)Cl3,400MHz)，7.55(1H，d,J=2.5Hz，2_H)、7.56(1H，dd,J=8.0/2.5Hz，6_H)、6.83(1H，d,J=8.0Hz，5-H)3.89(3H，s，OCH3)。13C-NMR(75MHz，CDCl3)，δ:152.5(C_4)、148(C_3)、125.2(C-6)、115.8(C-2)、113.8(C-5),56.3(OCH3)。其中，對羥基桂皮酸淡黃色塊狀結(jié)晶(甲醇)。mp224226°C，ESI-MSm/zl63[M+H]+。1H-WR(CD3ODdOOMHz)。δ:7.60(1Η,d,J=16.OHz,α-H)和6.28(1Η,d,J=16.OHz,β-H)、7·45(1Η,dd,J=8.6Hz,J=2.7Ηζ2，6_Η)和6.80(1Η,dd,J=8.6Ηζ,J=2.7Ηζ3,5-Η)ο13C-NMR(75MHz，CD3OD)δ:171.0(C=0)、161.2(C—4)、146.7(C-β)、131.l(2C-2，6)、127·2(C-1)、116·8(2C-3，5)、115·6(C-a)。上述酚酸類化合物經(jīng)體外經(jīng)典途徑抗補體活性篩選試驗，結(jié)果證實香草酸、對羥基桂皮酸對補體系統(tǒng)的經(jīng)典途徑有抑制作用，50%溶血所需供試品濃度(CH5tl)各為454士39μg/m禾口267士20μg/ml，見表1；表1香草酸和對羥基桂皮酸對補體系統(tǒng)經(jīng)典途徑的抑制作用(Y±SD,η=3)<<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>本發(fā)明的優(yōu)點是酚酸類化合物直接從天然產(chǎn)物中提取，化合物香草酸和對羥基桂皮酸對補體系統(tǒng)的經(jīng)典途徑具有較好的抑制作用。具體實施例方式實施例1制備白茅根乙酸乙酯萃取物并分離得到化合物取干燥白茅根10kg，切碎后用95%的乙醇加熱回流提取2次，第一次用10倍量乙醇提取2h，第二次用8倍量乙醇提取1.5h，合并提取液，減壓回收得浸膏，將浸膏混懸在水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇進(jìn)行萃取，合并乙酸乙酯萃取液濃縮至干即得乙酸乙酯萃取物56g。乙酸乙酯部位干法上樣進(jìn)行硅膠柱色譜，以石油醚(60°C)-乙酸乙酯(1001)梯度洗脫，得到FrlFr9九個流分。流分Fr4干法上樣進(jìn)行硅膠柱色譜，以氯仿-乙酸乙酯(401)梯度洗脫，所得401流分經(jīng)反相柱色譜，以甲醇-水(21)洗脫，得到化合物1(5.6mg)；所得11流分經(jīng)反相柱色譜，以甲醇-水(11)洗脫，再經(jīng)凝膠柱純化得化合物12mg，采用波譜學(xué)方法分析，確定其結(jié)構(gòu)分別為香草酸和對羥基桂皮酸。實施例2體外抗補體經(jīng)典途徑試驗取補體(豚鼠血清)0.lml，加入BBS配制成15溶液，用BBS對倍稀釋成110、120、140、180、1160、1320禾Π1640溶液。取11000溶血素、各濃度補體及2%SRBC各0.Iml溶于0.3mlBBS中，混勻，37°C水浴30min后放入低溫高速離心機，在5000rpm、4°C條件下離心lOmin。分別取每管上清0.2ml于96孔板，在405nm測定吸光度。實驗同時設(shè)置全溶血組(0.Iml2%SRBC溶于0.5ml三蒸水中)。以三蒸水溶血管的吸光度作為全溶血標(biāo)準(zhǔn)，計算溶血率。以補體稀釋度為X軸，各稀釋濃度補體造成的溶血百分率為Y軸作圖。選擇達(dá)到相似高溶血率的最低補體濃度作為確保體系能正常溶血所需的臨界補體濃度。取臨界濃度的補體與供試品混勻，于37°C預(yù)水浴IOmin后，加入適量BBS、溶血素和2%SRBC0將每管37°C水浴30min后放入低溫高速離心機，5000rpm、4°C條件下離心IOmin后分別取每管上清0.2ml于96孔板，405nm下測定吸光度。實驗同時設(shè)置化合物對照組、補體組和全溶血組。將化合物組吸光度值扣除相應(yīng)化合物對照組吸光度值后計算溶血率。以化合物物濃度作為X軸，溶血抑制率作為Y軸作圖。計算CH5tl值。權(quán)利要求一種酚酸類化合物，其特征是酚酸類化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)為當(dāng)R1＝COOH，R2＝OCH3時，化合物為香草酸；當(dāng)R1＝-CH＝CH-COOH，R2＝H時，化合物為對羥基桂皮酸。FSA00000107516100011.tif2.—種權(quán)利要求1所述的酚酸類化合物在制備抗補體藥物中的用途，其特征是香草酸、對羥基桂皮酸對補體系統(tǒng)的經(jīng)典途徑有抑制作用。全文摘要一種酚酸類化合物及其在制備抗補體藥物中的用途，其特征是酚酸類化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)為當(dāng)R1＝COOH，R2＝OCH3時，化合物為香草酸；當(dāng)R1＝-CH＝CH-COOH，R2＝H時，化合物為對羥基桂皮酸。本發(fā)明的優(yōu)點是酚酸類化合物直接從天然產(chǎn)物中提取，化合物香草酸和對羥基桂皮酸對補體系統(tǒng)的經(jīng)典途徑具有較好的抑制作用。文檔編號A61K31/192GK101817746SQ201010177088公開日2010年9月1日申請日期2010年5月19日優(yōu)先權(quán)日2010年5月19日發(fā)明者付麗娜,劉榮華,陳道峰申請人:江西中醫(yī)學(xué)院